精子质膜完整性双重荧光(SYBR14/PI)检测试剂盒

主要用途

精子质膜完整性双重荧光（SYBR14/PI）检测试剂是一种旨在使用 SYBR14 和碘化丙啶双重荧光染色技术，分析精子质膜完整性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种动物或人体精子细胞以及冻存精子细胞等。产品严格无菌，即到即用，操作简便，性能稳定，荧光清晰。

技术背景

在男科学（Andrology）中，精子（spermatozoa）分析提供了精子生成（spermatogenesis）、精子寿命、以及生育能力的基础信息。其中精子的活力（vitality）、运动能力（motility）、授精潜力（fertilizing potential）、膜结构或染色质结构完整性（integrity）、顶体反应（acrosomal reaction）功能的评价是精子分析的重要指标，也是决定人工受孕或体外授精（in vitro fertilization；IVF）的重要参数。其中质膜完整性（membrane integrity）是精子授精能力的标志，反映精子膜功能状态。结构完整和功能活化的质膜是精子细胞代谢、获能顶体反应、附着和穿越卵细胞等生理活动所必需的。使用SYBR14和碘化丙啶（Propidium Iodide；PI）双重荧光染色技术，是精子质膜完整性分析的最常用的方法。首先使用SYBR14染色，基于其可以自由穿越活体且质膜完好的精子细胞，与核内核酸结合的特点，显示质膜完整性。而碘化丙啶受到质膜完整的活体精子细胞（包括游动性和非游动性精子）的排斥，而容易进入破损或死亡精子细胞，表明质膜损伤。双染的作用，以帮助区分质膜结构完整性与否。通过常用的荧光显微镜，便可清晰观察到质膜状态（status）。

产品内容

保存液（Reagent A）

染色液 A（Reagent B）

染色液 B（Reagent C）

产品说明书

保存方式

保存在－20℃冰箱里；染色液 A 和 B（Reagent B 和 C）避免光照，有效保证 6 月。

用户自备

1.5 毫升离心管：用于样品操作的容器

微型台式离心机：用于样品染色操作的容器

血细胞计数器：用于细胞计数

载玻片和盖玻片：用于精子细胞爬片

（共聚焦）荧光显微镜：用于观察染色的精子细胞

实验步骤

1． 移取新鲜获得的 1 毫升精液（48 小时内）到 1.5 毫升离心管

2． 放进 37℃培养箱孵育 30 分钟

3． 放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 600g

4． 小心抽去上清液

5． 加入 xx 毫升保存液（Reagent A），混匀颗粒群

6． 在血细胞计数器上进行精子细胞计数，并调整到 2 X 10 7 精子细胞/毫升

7． 移取 100 微升精子细胞到新的 1.5 毫升离心管2

8． 加入 xx 微升染色液 A（Reagent B），混匀

9． 37℃温度下孵育 10 分钟，避免光照

10．小心加入 xx 微升染色液 B（Reagent E），混匀

11．37℃温度下孵育 10 分钟，避免光照

12．移取 50 微升到载玻片上

13．小心抽去染色液

14．盖上盖玻片

15．即刻在（共聚焦）荧光显微镜下观察并计数（注意：每个视野计数 200 个精子）

观察绿色荧光—染色液 B（Reagent E）：滤波器激发波长 490nm，散发波长 520nm

观察红色荧光—染色液 A（Reagent B）：滤波器激发波长：488nm；散发波长：630nm

16．分析结果

注意事项

1． 本产品为 20 次操作

2． 操作时须戴手套

3． 样品检测前，建议在血细胞计数器上进行精子细胞计数

4． 精子细胞计数时乘上稀释倍数 10 4。标准血细胞计数器（Hemocytometer）的计算方法是：

1 毫米方块的细胞计数 X 10 4（稀释倍数）＝实际细胞数/毫升

5． 染色完成后，即刻进行检测分析

6． 本公司提供系列发育生物学相关检测试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定荧光清晰

使用承诺

用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

说明书下载

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更新时间：2020-12-15 12:00:55    作者：云之羽生物     点击：637次