活体组织氧化应激活性氧（ROS）MitoSOX红色荧光测定试剂盒（超氧阴离子superoxide）

主要用途

活体组织氧化应激活性氧（ROS）超氧阴离子 MitoSOX 红色荧光测定试剂是一种旨在通过透膜荧光染色剂MitoSOX，在线粒体氧化损伤条件下，产生红色荧光，来检测冰冻组织细胞线粒体内超氧阴离子活性氧族的存在状况的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适宜于活体动物组织的分析。可以被用于细胞凋亡、信号传递、衰老、代谢和营养学等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。

技术背景

超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2 -）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡。其中线粒体氧化磷酸化副产物之一是超氧阴离子，为线粒体内最主要的活性氧族，与心血管疾病，包括高血压、冠状动脉硬化、糖尿病相关的血管疾病、神经退行性疾病（巴金森氏症、阿茨罕默症、肌萎缩硬化症）相关。MitoSOX是一种完全自由通过细胞膜，并选择性在活体细胞线粒体内长期滞留而不外漏的染色剂。一旦被超氧自由基阴离子氧化，便产生荧光。据此证明细胞线粒体内超氧阴离子活性氧族的存在。

产品内容

清理液（Reagent A）

染色液（Reagent B）

稀释液（Reagent C）

产品说明书

保存方式

保存染色液（Reagent B）在－20℃冰箱里，严格避免光照；其余的保存在 4℃冰箱里，有效保证 6 月。

用户自备

50 毫升锥形离心管：用于组织收集的容器

15 毫升锥形离心管：用于工作液配制和组织处理的容器

1.5 毫升离心管：用于工作液配制的容器

6 孔细胞培养板：用于组织染色的容器

培养箱或恒温水槽：用于染色孵育

（共聚焦）荧光显微镜：用于观察荧光组织

荧光分光光度仪：用于组织荧光定量检测

实验步骤

方法一：新鲜组织薄片定性检测

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent B）置于手心或室温下融化，稀释液（ReagentC）置于室温下均衡温度。然后移出 xx 微升染色液（Reagent B）到新的 15 毫升锥形离心管，加入 xx 毫升稀释液（Reagent C），混匀后，标记为染色工作液，置入暗室里。然后进行下列操作。

1． 手术取出动物组织

2． 放进预冷的 50 毫升锥形离心管

3． 加入 xx 毫升清理液（Reagent A）浸泡 15 秒

4． 用镊子取出组织，用无菌绵纸吸干

5． 即刻用刀片切离组织为 1cm X 1cm 大小的片状组织

6． 用镊子将组织薄片放进 6 孔培养板的一个孔

7． 加入 xx 毫升含有染色液（Reagent B）和稀释液（Reagent C）的染色工作液

8． 放进 37℃培养箱孵育 20 分钟，避免光照（注意：如果组织薄片较厚，可以增加孵育时间至 60 分钟）

9． 小心抽去染色工作液

10．加入 xx 毫升清理液（Reagent A）

11．用镊子将组织薄片放在载玻片上

12．压片

13．即刻在（共聚焦）荧光显微镜下观察（定性检测）：激发波长 510nm，散发波长 580nm――红色荧光增强，表明超氧阴离子含量高

方法二：组织匀浆定量检测

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent B）置于手心或室温下融化。移取 xx 微升稀释液（Reagent C）到新的 1.5 毫升离心管，放进 37℃恒温水槽里预热，然后加入 xx 微升染色液（ReagentB），混匀后，将染色工作液置入暗室里。然后进行下列操作。

1． 手术取出动物组织，并秤重以确定组织重量 200 至 500 毫克

2． 放进预冷的 50 毫升锥形离心管

3． 加入 xx 毫升清理液（Reagent A）

4． 用镊子取出组织，用无菌绵纸吸干

5． 即刻用刀片切碎组织

6． 放进一个预冷的 15 毫升锥形离心管

7． 加入 xx 微升至 xx 毫升预冷的稀释液（Reagent C）

8． 涡旋震荡 5 秒，充分混匀

9． 即刻放入预冷的 DOUNCE 匀浆器

10．在冰槽里用研磨棒匀化组织（注意：切莫过度匀化）

11．将所有组织匀浆物移入 15 毫升锥形离心管

12．置入冰槽里备用

13．移取 5 微升组织匀浆物进行蛋白定量检测：建议使用 Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒（30030.1）

14．移取 50 微升组织匀浆物（100 微克蛋白）或 50 微升稀释液（Reagent C）（背景对照）到 1 毫升比色杯里

15．加入 xx 微升含有染色液（Reagent B）和稀释液（Reagent C）的染色工作液

16．上下倾倒混匀

17．放进 37℃恒温水槽孵育 20 分钟，避免光照

18．即刻放进荧光分光光度仪检测：激发波长 510nm，散发波长 580nm——（样品 RFU—对照 RFU）＝实际 RFU：增加，表明超氧阴离子活性氧族含量高

注意事项

1． 本产品为 20 次（组织匀浆）或 8 次（组织薄片）操作，包括背景对照

2． 建议使用新鲜组织，手术切除后 1 小时内的样品

3． 操作时，须戴手套

4． 系统检测，背景对照只需 1 次

5． 染色工作液配制后 1 小时内使用为佳

6． 孵育时，须避免光照

7． 如果组织薄片较厚，可以增加孵育时间至 60 分钟

8． 组织匀浆时，切莫过度

9． 建议组织染色完成后，即刻进行荧光定量或定性分析

10．本公司提供系列活性氧检测试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定荧光清晰

使用承诺

用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

说明书下载

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更新时间：2024-01-15 17:15:58    作者：云之羽生物     点击：131次