特殊石蜡切片中性脂质油红O间接染色试剂盒说明书
发布时间：2023-12-18 11:05:16作者：云之羽来源：云之羽点击：129 次
主要用途
特殊石蜡切片中性脂质油红O间接染色试剂是一种旨在使用特殊固定处理和高度脂溶性偶氮染料油性红O染色技术，分析石蜡包埋组织切片中的中性甘油三脂、脂质以及脂蛋白等脂质状况的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良传统方法、成功实验证明的。主要适用于各种人体和动物组织石蜡切片的脂质检测。用于成脂细胞定性、细胞病理学分析（脂质细胞瘤；LIPOID）和识别（脂肪肉瘤；liposarcoma）等研究。产品即到即用，操作简捷，性能稳定，着色清晰。
技术背景
脂类物质（LIPIDS）是一类脂溶性（疏水性）的自然分子，包括脂肪酸（FATTY ACID）及其衍生物甘油一脂、二脂、三脂和磷脂，以及其它固醇类（STEROL）物质，例如胆固醇。脂类物质在机体中具有能量储存的作用，是膜结构的组成成分和细胞信号分子。油性红O（Oil Red O），又称为27号红色溶剂（Solvent Red 27）或苏丹红5B（Sudan Red 5B），是一种脂溶性偶氮染料（LYSOCHROME AZO DYE）。其分子式为C26H24N4O，分子量为408.51。染色显示脂类物质呈红色。由于组织切片在包埋前处理和染色前脱蜡的过程中，有机溶剂容易破坏和减少组织中的脂质成分，因此防护和固定组织中的脂质成分是油性红O染色的关键。
产品内容
清理液（Reagent A） 500毫升
固着液（Reagent B） 100毫升
乳化液（Reagent C） 100毫升
净化液（Reagent D） 300毫升
氧化液（Reagent E） 100毫升
修复液（Reagent F） 100毫升
脱蜡液（Reagent G） 300毫升（自备）
补水液A（Reagent H） 100毫升
补水液B（Reagent I） 100毫升
补水液C（Reagent J） 100毫升
补水液D（Reagent K） 100毫升
脱水液（Reagent L） 10毫升
染色液（Reagent M） 5毫升
澄清液（Reagent N） 5毫升
产品说明书 1份
保存方式
保存在4℃冰箱里，避免光照；有效保证3月
用户自备
苏木素复染试剂盒（80067）：用于常规染色后复染
经典水相封片液（12146）：用于染色后封片处理
无离子水：用于清洗样品
无菌手术刀和镊子：用于组织块处理
恒温培养箱：用于组织处理孵育
6孔细胞培养板：用于组织处理的容器
小型玻璃染色缸：用于组织或切片处理的容器
切片机：用于组织切片
明胶化载玻片和盖玻片：用于切片后铺片
中性树脂：用于切片封片
光学显微镜：用于切片染色后观察分析
实验步骤
一、 样本固着处理
1． 用无菌手术刀将新鲜组织切成2毫米厚的组织块
2． 即刻用无菌镊子夹起组织块，小心放进50毫升清理液（Reagent A）中浸泡3秒2次
3． 转移到5毫升固着液（Reagent B）里
4． 室温下浸泡孵育24小时，避免光照
5． 即刻用无菌镊子夹起组织块，小心放进上述50毫升清理液（Reagent A）中浸泡1小时
6． 小心转移到5毫升乳化液（Reagent C）里（注意：如果组织已经使用福尔马林固定的，则从这一步骤开始）
7． 在56℃恒温培养箱里浸泡孵育48小时，避免光照
8． 准备1个6孔细胞培养板，分别加入5毫升净化液（Reagent D）到3个孔里
9． 再分别加入5毫升清理液（Reagent A）到另外3个孔里
10． 小心转移组织块到上述6孔板的第一个孔里
11． 室温下孵育1小时
12． 转移组织块到上述6孔板的第二个孔里
13． 室温下孵育1小时
14． 依次直到第六个孔
15． 小心转移组织块到新鲜的5毫升氧化液（Reagent E）里
16． 在4℃冰箱里浸泡孵育24小时，避免光照
17． 小心转移到20毫升用户自备的无离子水里
18． 室温下孵育24小时
19． 小心转移到5毫升修复液（Reagent F）里
20． 室温下浸泡孵育24小时，避免光照
21． 小心转移到20毫升用户自备的无离子水里
22． 室温下孵育8小时（注意：可以孵育24小时）
23． 用绵纸吸干组织快
24． 即刻进行常规石蜡包埋过程的基本操作
25． 取出组织块，进行缓慢石蜡切片，为10微米厚，并铺片在明胶化载玻片上
二、 脱蜡处理
1． 取出10片待测的10微米厚的石蜡包埋的组织切片
2． （选择步骤）放进80℃烘箱，孵育30分钟
3． （选择步骤）室温下静置15分钟
4． 按下表依次放进小染色缸里孵育
染色缸 | 孵育时间 |
50毫升脱蜡液（Reagent G） | 15分钟 |
50毫升脱蜡液（Reagent G） | 15分钟 |
50毫升脱蜡液（Reagent G） | 15分钟 |
50毫升补水液A（Reagent H） | 3分钟 |
50毫升补水液B（Reagent I） | 3分钟 |
50毫升补水液C（Reagent J） | 3分钟 |
50毫升补水液D（Reagent K） | 3分钟 |
5． 小心移去切片上的补水液D（Reagent K）
6． 小心加上200微升清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面
7． 室温下孵育5分钟
8． 小心移去切片上的清理液（Reagent A）
三、 样本染色处理
1． 小心加上200微升脱水液（Reagent L），覆盖整个生长表面
2． 室温下静置5分钟
3． 小心抽去脱水液（Reagent L）
4． 重复实验步骤1至3一次
5． 小心加上200微升染色液（Reagent M），覆盖整个生长表面
6． 室温下静置7分钟；或直至可见红色
7． 小心抽去染色液（Reagent M）
8． 室温下，小心加入200微升清理液（Reagent A）
9． 室温下孵育2分钟
10． 小心抽去清理液（Reagent A）
四、样本复染处理
1． 小心加上200微升澄清液（Reagent N），覆盖整个生长表面
2． 室温下孵育5分钟
3． 小心抽去澄清液（Reagent N）
4． 小心加入200微升清理液（Reagent A）
5． 室温下孵育2分钟
6． 小心抽去清理液（Reagent A）
7． 样本复染处理（苏木素）
8． 即刻在一般光学显微镜下观察：脂类物质呈现红色（如果复染则细胞核呈现篮色）
注意事项
1． 本产品为20次操作
2． 操作时，须戴手套
3． 建议组织块厚度不宜超过2毫米，否则影响试剂渗透，保护脂质成分
4． 乳化液（Reagent C）为不透明的溶液
5． 铺片须使用明胶化载玻片，否则染色会掉片
6． 用户可以使用二甲苯替代脱蜡液（Reagent G）
7． 建议使用玻璃染色缸，除说明书规定之外
8． 染色时更换试剂溶液时，保持切片面基本晾干
9． 试剂溶液在切片表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满切片表面
10． 整个操作，在避光状态下进行
11． 样品染色避免过度，肉眼可见红色即可终止染色
12． 建议使用苏木素复染试剂盒（80067），增加染色对比度
13． 染色完成后，即刻进行光学显微镜观察
14． 样品染色后保存，避免光照
15． 封片处理，避免使用有机溶剂类包括乙醇等，而使用水相封片液；建议使用经典水相封片液（12146）
16． 本公司提供系列脂类染色试剂产品
质量标准
1． 本产品经鉴定性能稳定
2． 本产品经鉴定显色清晰
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