精子顶体形态/获能金霉素（CTC）荧光染色试剂盒说明书

主要用途

精子顶体形态/获能金霉素（CTC）荧光染色试剂是一种旨在使用金霉素荧光染色技术，分析精子获能状态/顶体状态的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种动物或人体精子细胞以及冻存精子细胞的获能检测。产品严格无菌，即到即用，操作简便，性能稳定，荧光清晰。

技术背景

在男科学（Andrology）中，精子（spermatozoa）分析提供了精子生成（spermatogenesis）、精子寿命、以及生育能力的基础信息。其中精子的活力（vitality）、运动能力（motility）、授精潜力（fertilizing potential）、膜结构或染色质结构完整性（integrity）、顶体反应（acrosomal reaction）功能的评价是精子分析的重要指标，也是决定人工受孕或体外授精（in vitro fertilization；IVF）的重要参数。精子获能（capacitation）后，会产生生理性改变，包括钙离子浓度变化，蛋白磷酸化，顶体基质和膜重组，从而精子进入女性生殖道，穿入卵子细胞。其中顶体反应，是指当精子接近卵子实施授精时，精子头部前半端的帽状结构顶体，释放出溶解酶，以便精子和卵子的膜融合。获能/顶体反应测试是一项稳定的精子功能参数，可以用于预测受精成功率。因此顶体的结构完整性（intact）是评价的主要标志，也是不育症和避孕药物研究的对象。使用金霉素（chlortetracycline；CTC）荧光染料染色技术，是精子获能状态，以及精子头部顶体状态分析的最常用的方法。通过常用的荧光显微镜（激发波长395nm，散发波长510nm）便可清晰观察到绿色顶体状态（status）。  

产品内容

清理液（Reagent A）   25毫升

染色液（Reagent B）    200微升

固着液（Reagent C）   50微升

产品说明书      1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里；染色液（Reagent B）避免光照，有效保证6月

用户自备

1.5毫升离心管：用于样品操作的容器

微型台式离心机：用于样品操作

血细胞计数器：用于细胞计数

载玻片和盖玻片：用于精子细胞爬片

（共聚焦）荧光显微镜：用于观察染色的精子细胞

实验步骤

1． 准备好获能处理的精子细胞

2． 放进微型台式离心机离心5分钟，速度为600g

3． 小心抽去上清液

4． 加入1毫升清理液（Reagent A），混匀颗粒群

5． 在血细胞计数器上进行精子细胞计数，并调整到2 X 107精子细胞/毫升（注意：1小时内完成检测）

6． 移取10微升精子细胞到新的1.5毫升离心管

7． 加入10微升染色液（Reagent B），混匀

8． 室温下孵育30分钟，避免光照

9． 加上1微升固着液（Reagent D），.混匀

10． 即刻移取20微升到洁净的载玻片一端

11． 用盖玻片或另一个载玻片推片

12． 盖上盖玻片或封片液

13． 即刻在（共聚焦）荧光显微镜（400X）下观察并计数（注意：每个视野计数200个精子）

观察绿色荧光—滤波器激发波长395nm，散发波长510nm ――可见绿色荧光，表明精子顶体区域

14． 分析结果

注意事项

1． 本产品为20次操作

2． 操作时须戴手套

3． 样品检测前，建议在血细胞计数器上进行精子细胞计数

4． 精子细胞计数时乘上稀释倍数104。标准血细胞计数器（Hemocytometer）的计算方法是：

1毫米方块的细胞计数X 104（稀释倍数）＝实际细胞数/毫升

5． 用户可以使用离子载体（ionophore）A23187，终浓度10微摩尔/升，孵育3小时，可以获得获能精子反应性顶体

6． 染色完成后，即刻进行检测分析

7． 用户可以使用激发波长360至400nm，散发波长470至530nm的滤波片

8． 参考图像如下（从左到右为I至III分类）：

9． 本公司提供系列发育生物学相关检测试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定荧光清晰

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