二苯胺(DPA)DNA比色定量测定试剂盒

主要用途

二苯胺DNA比色法定量测定试剂是一种旨在通过二苯胺与 DNA 的特异性结合反应，借助可见光波长的吸光峰值的变化，比色测定样品中 DNA 的绝对含量或浓度的技术方法。其适用于各种原核生物和真核生物的细胞或组织 DNA 以及环境中 DNA 含量分析。产品即到即用，性能稳定，简易方便，无需样品纯化，定量准确。

技术背景

二苯胺（diphenylamine）具有与 DNA 酸性水解脱嘌呤后释放的脱氧核糖（deoxyribose）转变的ω-羟基菊芋糖醛（ω-hydroxylevulinyl aldehyde）特异性反应的功能，形成蓝色复合物。但不与 RNA 的核糖 （ribose）反应。通过可见光（600nm）吸收可以进行定量分析。因此避免了 A260 测定的种种限制，例如对样品的纯化要求、对 DNA 的单链双链的要求和对紫外光 UV 的需求，以及 RNA 的干扰。

产品内容

缓冲液（Reagent A）        8 毫升

分解液（Reagent B）        8 毫升

反应液（Reagent C）        25 毫升

稳定液（Reagent D）        125 微升

标准液（Reagent E）        200 微升

产品说明书                        1 份

保存方式

保存标准液（Reagent E）在—20℃冰箱里，保存稳定液（Reagent D）在 4℃冰箱里，其余的保存在室温下；其中反应液（Reagent C）和稳定液（Reagent D），具有腐蚀性，注意操作安全，且避免光照，有效保证 6月。

用户自备

1.5 毫升离心管：用于样品操作的容器

恒温水槽：用于反应物孵育

比色皿：用于比色分析的容器

分光光度仪：用于样品比色测定

实验步骤

一、 测定准备

1． 准备好待测样品，置于冰槽里

2． 设定好分光光度仪：波长 600nm，并置零2

3． 准备好 9 个 1.5 毫升离心管，标记为 1 至 9 号管

4． 按照下表配制标准液

5． 放进冰槽里备用，避免光照

二、比色测定

实验开始前，小心移取 6 毫升反应液（Reagent C）和 30 微升稳定液（Reagent D）到 15 毫升锥形离心管，混匀后，标记为反应工作液，避免光照。然后进行下列操作。

1． 准备至少 10 个新的 1.5 毫升离心管作为测定管：标记 9 个标准管和 1 个待测样品管

2． 分别加入 140 微升缓冲液（Reagent A）到每一个标准管和样品管

3． 分别加入 10 微升上述配制的标准液（Reagent E）到相应测定管里（注意：浓度和管号对号入座）

4． 加入 10 微升待测样品到样品管里

5． 分别加入 150 微升分解液（Reagent B）到所有测定管里

6． 放进 70℃干式恒温槽或恒温水槽孵育 20 分钟

7． 在室温下静置，直至试管温度降温到室温（15 至 30 分钟）

8． 分别加入 600 微升含有反应液（Reagent C）和稳定液（Reagent D）的反应工作液到所有测定管里

9． 放进 37℃培养箱（暗室环境）孵育 5 小时

10．即刻分别移入到 1 毫升比色皿，放进分光光度仪读数：获得吸光读数

11．构建标准曲线：纵座标（Y 轴）为吸光单位（OD）；横座标（X 轴）为标准 DNA 浓度（微克/10 微升）

12．根据标准曲线获得样品对应 DNA 浓度（微克/10 微升）

13．样品实际 DNA 浓度：

[根据标准曲线获得样品对应 DNA 浓度（微克/10 微升）X 样品稀释倍数]÷100＝微克/毫升

注意事项

1． 本产品为 10 次样本操作

2． 操作时，须戴手套

3． 系统操作时，标准样品测定只需 1 次

4． 反应液（Reagent C）、稳定液（Reagent D）和反应工作液，避免光照

5． 操作时注意安全，尤其在使用反应液（Reagent C）、稳定液（Reagent D）和反应工作液时，十分小心

6． 待测样品无需纯化，包括去蛋白、去 RNA 等处理7． 计算实际浓度时，不要忘记待测样品的稀释倍数

8． 使用无水乙醇清洗比色皿

9． 本公司提供系列 DNA 定量分析试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定定量准确

使用承诺

用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

说明书下载

如需要【二苯胺(DPA)DNA比色定量测定试剂盒】电子版说明书及相关资料，请联系客服索取！

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更新时间：2020-12-15 12:00:51    作者：羽哚生物     点击：727次