冰冻切片神经元高尔基法(GOLGI-COX)染色试剂盒

主要用途

冰冻切片神经元高尔基法快速染色试剂是一种旨在使用亲银还原技术，分析固定处理的冰冻组织切片中神经元（neuron）、锥体细胞（pyramidal cell）、胶质细胞（glia cell）、少突触胶质细胞（oligodendrocyte）和其它突起（process）尤其树突（dendrites）形态学的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良Golgi-Cox方法、成功实验证明的。主要适用于冰冻脑组织或外周神经组织切片的相关神经细胞检测。广泛用于动物脑神经病理生理解剖学的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。

技术背景

意大利科学家高尔基（Camillo Golgi）于 1873 年发明了神经细胞黑色反应的浸银染色技术，从而开辟了神经系统形态结构、演变、单系发生、构建以及疾病等学科研究，并建立了神经学说。脑神经组织经固定，亲银染色后，呈现部分神经细胞完全染色，而其它神经细胞没有任何着色的高度选择性染色。

产品内容

固着液 A（Reagent A）

固着液 B（Reagent B）

清理液（Reagent C）

染色液（Reagent D）

显色液 A（Reagent E）

显色液 B（Reagent F）

产品说明书

保存方式

保存在 4℃冰箱里，避免光照；试剂具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证 3 月。

用户自备

30％蔗糖：用于样品脱水处理

无离子水：用于工作液的配制

1.5 毫升离心管：用于工作液配制的容器

无菌手术刀和镊子：用于解剖动物脑组织

小型玻璃染色缸：用于组织或切片处理的容器

切片机：用于组织切片

明胶化载玻片和盖玻片：用于切片后铺片

中性树脂：用于切片封片

光学显微镜：用于切片染色后观察分析

实验步骤

一、 样本固着处理

1． 常规麻醉动物和手术（建议：使用生理盐水由心脏处灌注三次，每次 60 毫升，去除血液直至澄清；如果切片易碎，可以使用无离子水快速冲洗组织替代灌注）

2． 即刻小心取出脑组织

3． 用无菌手术刀将脑组织切成 0.5 厘米厚的组织块

4． 即刻用无菌镊子夹起组织块

5． 小心转移到含有 xx 毫升 固着液 A（Reagent A）和 xx 毫升 固着液 B（Reagent B）的混合液里（20 毫升/2 块组织块）

6． 室温下浸泡孵育 2 周，避免光照

7． 小心转移到用户自备的 30％蔗糖溶液里

8． 在 4℃温度下浸泡孵育 48 小时，或组织沉底，避免光照（注意：不宜超过 1 周）

9． 用绵纸或滤纸吸干组织块

10．放进－20℃冰箱里

11．取出组织块，在－20℃条件下进行包埋后，缓慢冰冻切片，为 40 至 150 微米厚，并铺片在明胶化载玻片上（注意：碎片是常见现象，参考注意事项 3 和 4）

12．置于－20℃冰箱里保存

二、 样本染色处理

准备一个 20 毫升塑料瓶，加入 10 毫升用户自备的无离子水，然后分别加入 xx 毫升 显色液 A（Reagent E）和 显色液 B（Reagent F），混匀，标记为 显色工作液（有效使用 10天），避免光照。然后进行下列操作。

1． 取出待测的 40 至 150 微米厚的冰冻组织切片

2． 室温下，小心将切片置入 xx 毫升 清理液（Reagent C）中孵育 1 分钟

3． 小心移去切片上的 清理液（Reagent C）

4． 小心加上 xx 微升 染色液（Reagent D），铺满整个切片样品表面

5． 室温下孵育 30 分钟

6． 小心移去切片上的 染色液（Reagent D）

7． 室温下，小心将切片置入 xx 毫升 清理液（Reagent C）中孵育 1 分钟（注意：反复轻柔搅动，清洗完全）

8． 小心移去切片上的 清理液（Reagent C）

9． 小心加上 xx 微升 显色工作液，铺满整个切片样品表面

10．室温下孵育 10 至 30 分钟，直至呈现黑色，即刻终止，避免光照（注意：期间可以在显微镜下观察）

11．小心移去切片上的 显色工作液

12．室温下，小心将切片置入 xx 毫升 清理液（Reagent C）中孵育 1 分钟

13．小心移去切片上的 清理液（Reagent C）

14．（选择步骤）进行复染操作（建议使用 甲苯酚紫（CRESYL VIOLET）复染试剂盒－80052）

15．透明处理

16．放上盖玻片或封片（中性树脂）

17．即刻在一般光学显微镜下观察：神经元、锥体细胞、胶质细胞、少突触胶质细胞（椭圆形如同串珠）和其它突起，呈现黑色（如果复染――细胞核呈现蓝色，胞浆尼氏（体）物质呈现粉红至紫色）

注意事项

1． 本产品为 20 次（40 块组织和 20 次染色）操作

2． 操作时，须戴手套

3． 如果样品切片时，出现组织碎片，建议：第一，蔗糖处理 72 小时或直至组织沉底；第二，使用异戊烷快速冷冻组织 30 秒至 1 分钟，后续包埋后，再行—19℃均衡温度后切片；如果无法解决，建议使用震动切片或石蜡切片等；第三，使用震动切片前，置于 6%蔗糖或加入 50 微升 清理液（ReagentC）湿润后再行切片

4． 快速冷冻切片操作要点：固定处理后，30%蔗糖浸泡，第一个 12 小时换液一次，继续浸泡至 72 小时，可长达 1 周

1） 准备 300 毫升异戊烷在干冰里 30 分钟，温度达到-70℃

2） 将组织放在网架容器，缓慢放进异戊烷里 30 秒至 1 分钟。理想状态是组织完全冰冻，如果时间过久，组织会碎裂

3） 迅速取出，用预冷的棉纸去除残留异戊烷

4） 锡纸包裹，-70 储存或准备切片

5） 切片机温度-19℃

6） 组织块容器置于干冰中，加入包埋液在容器里，包埋液冻住后，放进组织块，再加入少量包埋液在组织块上

7） 缓慢切片

5． 关于切片制备，参考论文《临床和实验病理学杂志》2017 Jan 33（1）,113-116 页（王蕾 张芳 汤仁仙 张冠群 牛海晨）

6． 试剂具有腐蚀性，注意操作安全，尤其使用 染色液（Reagent D）

7． 铺片须使用明胶化载玻片，否则染色会掉片：第一用毛笔涂刷；第二保持湿润 3 小时；第三用 PARAFIN包裹后压片

8． 切片建议 100 至 200 微米，过厚和过薄不利于检测神经细胞

9． 建议使用玻璃染色缸

10．每次更换试剂溶液时，保持切片面基本晾干

11．试剂溶液在切片表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满切片表面

12．整个操作，在避光状态下进行

13．染色完成后，即刻进行光学显微镜观察

14．样品染色后保存，避免光照

15．本公司提供系列组织细胞神经系统成分染色试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定显色清晰

使用承诺

用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

说明书下载

如需要【冰冻切片神经元高尔基法(GOLGI-COX)染色试剂盒】电子版说明书及相关资料，请联系客服索取！

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更新时间：2020-12-15 12:00:44    作者：羽哚生物     点击：660次