红细胞可溶性膜蛋白(纯提)制备试剂盒

主要用途

红细胞可溶性膜蛋白（纯提）制备试剂盒是一种旨在使用低渗处理，充分裂解红细胞膜，并在蛋白酶抑制剂的帮助下，通过强化溶解，分离和收集所有高纯可溶性红细胞膜蛋白质（完整蛋白和跨膜蛋白以及膜相关蛋白等）的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种人体和动物红细胞样品。可直接用于特定蛋白后续纯化、酶谱分析、二维蛋白电泳、西方杂交、免疫沉淀、功能鉴定和质谱分析以及蛋白组学研究等。产品即到即用，性能稳定，操作便捷，收集效果显著。

技术背景

红细胞（erythrocyte）是血细胞中最常见的细胞类型，细胞浆内含有丰富的含血红蛋白，其功能在于传送氧气。成熟红细胞缺少细胞核（anucleate）和大多数细胞器（例如线粒体、高尔基体、内质网等），生命周期为 120 天。红细胞膜由外层糖被（glycocalyx）、中间层脂质双层（lipid bilayer）和内层骨架（skeleton）构成。其中膜蛋白，占 60%，在红细胞的可变形性（deformability）、弹性（flexibility）和耐受性（durability）方面发挥作用。红细胞膜蛋白超过 50 种，包括传运蛋白（例如 Band 3）、血型抗原（例如 A、B、O 型等）、结构蛋白（例如 Band 4.1R、血影收缩蛋白 spectrin、锚蛋白 ankyrin 等）。红细胞膜的分离是生物膜的生化研究的主要工具，其来源丰富、没有细胞内质膜干扰、脂类成分萃取容易。通过低渗裂解以及蛋白酶抑制剂的共同作用，防止裂解后红细胞内各种活性蛋白成分遭到活化的内源性蛋白酶的破坏，充分保留蛋白质的免疫和生物学活性，同时强化萃取和溶解，确保膜蛋白（完整蛋白 integral protein 和跨膜蛋白transmembrane protein）的高产、高纯、高溶。

产品内容

清理液（Reagent A）        100 毫升

裂解液（Reagent B）        200 毫升

活性液（Reagent C）        200 微升

净化液（Reagent D）        500 毫升

溶解液（Reagent E）        10 毫升

产品说明书            1 份

保存方式

保存活性液（Reagent C）在-20℃冰箱里；其余的保存在 4℃冰箱里；有效保证 6 月。

用户自备

抗凝管：用于血液样品操作的容器

1.5 毫升离心管：用于样品保存的容器

15 毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

4℃台式离心机：用于样品操作

实验步骤

实验开始前，将试剂盒里的活性液（Reagent C）从－20℃的冰箱里取出，放进冰槽里冻融，然后移出 10毫升裂解液（Reagent B）到 15 毫升锥形离心管，加入 10 微升活性液（Reagent C），充分混匀，置于冰槽里，标记为裂解工作液。然后进行下列操作。

1． 准备好肝素、ACD 或 EDTA 等抗凝管

2． 抽取 3 毫升血液，置于抗凝管里

3． 放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 10000g

4． 小心抽去上层液体

5． 加入 5 毫升清理液（Reagent A），混匀颗粒群

6． 放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 10000g

7． 小心抽去上层液体

8． 重复实验步骤 5 至 7 一次

9． 加入 10 毫升裂解工作液，混匀颗粒群

10．上下倾倒 5 至 10 次混匀

11．放进冰槽里孵育 30 分钟，其间每隔 10 分钟上下倾倒 5 至 10 次混匀

12．放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 20000g

13．小心抽去上清液

14．加入 5 毫升净化液（Reagent D），混匀颗粒群

15．放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 20000g

16．重复实验步骤 14 至 15 二次或直至颗粒呈现乳白色

17．加入 500 微升溶解液（Reagent E）

18．（选择步骤）移取 10 微升进行蛋白定量测定 （注意：建议使用 Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒－30030.1）

19．转移到 1.5 毫升离心管

20．即刻放进－70℃冰箱里保存

21．或放进冰槽里，继续后续（蛋白定量、西方杂交、免疫沉淀等）操作

注意事项

1． 本产品为 20 次操作

2． 操作时，须戴手套

3． 根据血液容量的不同，按比例调整试剂用量

4． 所有操作均须在 4℃状态下进行

5． 制备产物如果放在－70℃冰箱里储存备用，避免反复冻融

6． 本公司提供系列蛋白制备试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定无蛋白酶污染

使用承诺

用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

说明书下载

如需要【红细胞可溶性膜蛋白(纯提)制备试剂盒】电子版说明书及相关资料，请联系客服索取！

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更新时间：2020-12-15 12:00:42    作者：羽哚生物     点击：727次