精子DNA甲苯胺蓝(toluidineblue)染色检测试剂盒

主要用途

精子DNA甲苯胺蓝（toluidine blue）染色检测试剂是一种旨在使用染料甲苯胺蓝，整合到损伤的致密染色质中，使不完整核呈现紫色，确定精子核成熟度和完整性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种动物或人体精子细胞以及冻存精子细胞。产品严格无菌，即到即用，操作简便，性能稳定，荧光清晰。

技术背景

在男科学（Andrology）中，精子（spermatozoa）分析提供了精子生成（spermatogenesis）、精子寿命、以及生育能力的基础信息。其中精子的活力（vitality）、运动能力（motility）、授精潜力（fertilizing potential）、膜结构或染色质结构完整性（integrity）、核成熟度（nuclear maturity）、顶体反应（acrosomal reaction）功能的评价是精子分析的重要指标，也是决定人工受孕或体外授精（in vitro fertilization；IVF）的重要参数。其中精子核成熟度反映了精子从精原细胞发育为成熟精子过程中组蛋白—精核蛋白取代反应的发生与否，决定精子生育能力的主要因素之一。精液中成熟精子低于10％，是低生育力精液评估界限，也是妇女反复性流产的可能原因之一。使用染料甲苯胺蓝（toluidine blue）染色技术，是精子核成熟度分析的最常用的方法。甲苯胺蓝是一种异染性和定色性的碱性染料，用于染色质染色。基于甲苯胺蓝可以整合到损伤的致密染色质中，使DNA完整性缺失的精子呈现紫色，以此分析精子核成熟度不足或完整性不足。

产品内容

清理液（Reagent A）

固着液（Reagent B）

酸性液（Reagent C）

染色液（Reagent D）

净化液（Reagent E）

产品说明书

保存方式

保存在 4℃冰箱里；固着液（Reagent B）和净化液（Reagent E）具有挥发性，注意密闭瓶盖；染色液（ReagentC）避免光照；试剂具有腐蚀性，注意操作安全；有效保证 3 月。

用户自备

1.5 毫升离心管：用于样品操作的容器

微型台式离心机：用于样品操作

载玻片和盖玻片：用于精子细胞爬片

光学显微镜：用于观察染色的精子细胞

实验步骤

1． 移取新鲜获得的 1 毫升精液（30 分钟至 1 小时内）到 1.5 毫升离心管

2． （选择步骤）放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 600g

3． （选择步骤）小心抽去上清液

4． （选择步骤）加入 xx 毫升清理液（Reagent A），混匀颗粒群

5． （选择步骤）放进微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 600g

6． （选择步骤）小心抽去上清液

7． （选择步骤）重复实验步骤 4 至 6 一次

8． （选择步骤）加入适量清理液（Reagent A），混匀颗粒群，并调整精子细胞至 107 细胞/毫升

9． 即刻移取 20 微升到洁净的载玻片一端

10．用盖玻片或另一个载玻片推片

11．加上 xx 微升预冷的固着液（Reagent B），覆盖样品表面

12．4 度冰箱里孵育 30 分钟

13．小心抽去固着液

14．加上 xx 微升预冷的酸性液（Reagent C），覆盖样品表面

15．4 度冰箱里孵育 5 分钟

16．小心抽去酸性液

17．小心加上 xx 微升清理液（Reagent A），覆盖样品表面

18．室温下孵育 2 分钟

19．小心抽去清理液

20．重复实验步骤 17 至 19 一次

21．小心加上 xx 微升染色液（Reagent D），覆盖样品表面

22．室温下孵育 10 分钟，避免光照

23．小心抽去染色液

24．小心加上 xx 微升净化液（Reagent E），覆盖样品表面

25．4 度冰箱里孵育 3 分钟

26．小心抽去净化液

27．重复实验步骤 24 至 26 一次

28．（选择步骤）透明处理

29．（选择步骤）盖上盖玻片或封片

30．即刻在光学显微镜下观察并计数（注意：每个视野计数 200 个精子）

31．分析结果（参考图）：核完整性精子呈现淡绿色（图示 1）；核不完整性精子呈现紫色（图示 2）

参考随货纸版说明书。

注意事项

1． 本产品为 50 次操作

2． 操作时须戴手套

3． 固着液（Reagent B）和净化液（Reagent E）具有挥发性，注意密闭瓶盖

4． 试剂具有腐蚀性，注意操作安全，尤其是酸性液（Reagent C）

1． 每次更换试剂溶液时，保持切片面基本晾干

2． 试剂溶液在切片表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满切片表面

3． 染色液（Reagent D）避免光照

4． 染色完成后，即刻进行光学显微镜观察

5． 样品染色后保存，避免光照

6． 本公司提供系列发育生物学相关检测试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定荧光清晰

使用承诺

用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

说明书下载

如需要【精子DNA甲苯胺蓝(toluidineblue)染色检测试剂盒】电子版说明书及相关资料，请联系客服索取！

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更新时间：2020-12-15 12:00:40    作者：羽哚生物     点击：587次