冰冻切片磷酸化酶活性染色试剂盒

主要用途

冰冻切片磷酸化酶活性染色试剂是一种旨在使用底物葡萄糖-1-磷酸，在磷酸化酶的催化下，产生新的多糖分子，进而使用碘反应试剂，产生程度不等的蓝色沉淀，来分析冰冻组织样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良高内（Takeuchi）技术、成功实验证明的。主要适用于各种动物组织细胞的磷酸化酶活性定性检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。

技术背景

磷酸化酶（phosphorylase），包括肌磷酸化酶（myophosphorylase）和淀粉磷酸化酶（amylophosphorylase），在机体糖原分解（glycogenolysis）利用上发挥重要作用。主要催化糖原上α（1→4）糖苷链（glycosidic linkage）的磷酸分解（phosphorolytic cleavage）反应，释放葡萄糖-1-磷酸产物。磷酸化酶存在于肝组织、肌肉组织（骨骼肌、平滑肌、心肌）、软骨组织和脑组织中。其缺失将导致肌肉营养不良症（McArdle 综合征）和肝磷酸化酶缺乏症（Hers 病）。通过使用微量糖原（glycogen）作为引导分子（primer）和单磷酸腺苷（AMP）作为激活分子，由底物葡萄糖-1-磷酸（α-D-Glucose-1-Phosphate），在酸性条件下，经过磷酸化酶的催化，产生新的多糖分子（淀粉或糖原），进而使用碘反应试剂（iodine），产生程度不等的蓝色（紫蓝或深蓝等），由此用于鉴定磷酸化酶的活性。

产品内容

清理液（Reagent A）   30 毫升

反应液（Reagent B）   10 毫升

固定液（Reagent C）   20 毫升

染色液（Reagent D）   10 毫升

产品说明书         1 份

保存方式

保存反应液（Reagent B）在－20℃冰箱里，其余的保存在 4℃冰箱里；固定液（Reagent C）具有挥发性，注意密闭瓶盖；染色液（Reagent D）避免光照；有效保证 6 月。

用户自备

培养箱：用于反应孵育

光学显微镜：用于切片染色后观察分析

实验步骤1． 取出待测的 10 微米厚的冰冻组织切片

2． 小心加上 200 微升清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个样品表面

3． 小心移去切片上的清理液（Reagent A）

4． 小心加上 200 微升反应液（Reagent B）在切片上，铺满整个样品表面

5． 放进 37℃培养箱，孵育 90 分钟（注意：避免干枯）

6． 小心移去切片上的反应液（Reagent B）

7． 小心加上 200 微升固定液（Reagent C）在切片上，铺满整个样品表面

8． 在室温下孵育 5 分钟

9． 小心移去切片上的固定液（Reagent C）

10．小心加上 200 微升染色液（Reagent D）在切片上，铺满整个样品表面

11．在室温下孵育 5 分钟，或直至组织细胞呈现蓝色

12．小心移去切片上的染色液（Reagent D）

13．小心加上 200 微升清理液（Reagent A）在切片上，铺满整个样品表面

14．小心移去切片上的清理液（Reagent A）

15．重复实验步骤 13 至 14 一次

16．放上盖玻片或封片（甘油封片液）

17．即刻在光学显微镜下观察：表达磷酸化酶的细胞为阳性细胞，呈现蓝色或紫蓝色

注意事项

1． 本产品为 50 次操作

2． 操作时，须戴手套

3． 反应液（Reagent B）避免反复冻融

4． 固定液（Reagent C）具有挥发性，注意密闭瓶盖

5． 每次更换试剂溶液时，保持切片面基本晾干

6． 试剂溶液在切片表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满切片表面

7． 整个操作，在避光状态下进行

8． 染色孵育时间，根据样品和酶活性强弱调整，通常为 60 至 180 分钟

9． 染色完成后，即刻进行光学显微镜观察

10．本公司提供系列组织细胞酶活性染色试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定显色清晰

使用承诺

用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

说明书下载

如需要【冰冻切片磷酸化酶活性染色试剂盒】电子版说明书及相关资料，请联系客服索取！

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更新时间：2020-12-15 12:00:45    作者：云羽生物     点击：706次