卵母细胞皮质颗粒（cortical granules）花生凝集素荧光标记（PNA-FITC）染色试剂盒说明书

主要用途

卵母细胞皮质颗粒（cortical granules）花生凝集素荧光标记（PNA-FITC）染色试剂是一种旨在使用荧光素标记的花生凝集素荧光染色技术，分析卵母细胞皮质颗粒分布和密度状况的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种动物或人体卵母细胞包括冻存或衰老卵母细胞，以及体内/体外受精、体内/体外成熟或活化卵母细胞等皮质颗粒分布和密度检测。产品严格无菌，即到即用，操作简便，性能稳定，荧光清晰。

技术背景

卵母细胞皮质颗粒（cortical granules；CG）是一种膜结合型分泌性球状或椭圆状囊泡细胞器，起源于卵泡生长期的高尔基体。卵母细胞未成熟时，分布在胞浆内。当卵母细胞生长和成熟时，迁徙到皮质，形成周边卵黄膜下连续一层结构。在卵母细胞皮质层，皮质颗粒实行胞外分泌（exocutosis）等皮质反应（cortexreaction），应对卵母细胞授精或活化引起的胞浆钙离子水平增高。其内容物释放进卵周隙（perivitellinespace），改变透明带（zona pellucida），阻止多精入卵（polyspermy）。使用荧光素标记的花生凝集素（Isothiocyano-fluoresceinated peanut Arachis hypogaea agglutinin；PNA-FITC）荧光染色技术，是卵母细胞皮质反应分析的最常用的方法，包括卵母细胞减数分裂成熟阶段、授精、活化等，皮质颗粒的分布和密度变化。 通过常用的荧光显微镜（激发波长480nm，散发波长530nm）便可清晰观察到绿色荧光皮质颗粒。

产品内容

处理液（Reagent A）            2 X 2 毫升

清理液（Reagent B）            100 毫升

固着液（Reagent C）            10 毫升

封阻液（Reagent D）            30 毫升

通透液（Reagent E）            10 毫升

染色液（Reagent F）            2 毫升

复染液（Reagent G）            2 毫升

产品说明书                1 份

保存方式

保存在－20℃冰箱里；染色液（Reagent F）和复染液（Reagent G）避免光照，有效保证 6 月。

用户自备

1.5 毫升离心管：用于样品操作的容器。

载玻片和盖玻片：用于样品操作。

（共聚焦）荧光显微镜：用于观察染色的细胞。

实验步骤2

1． 移取新鲜获得的卵母细胞到 1.5 毫升离心管

2． 加入 200 微升处理液（Reagent A），混匀

3． 置于 37℃培养箱里孵育 4 分钟

4． 小心抽去处理液

5． 加入 500 微升清理液（Reagent B），混匀

6． 小心抽去清理液

7． 重复实验步骤 5 至 6 一次

8． 加入 500 微升固着液（Reagent C），混匀

9． 室温下孵育 30 分钟

10．小心抽去固着液

11．加入 500 微升封阻液（Reagent D），混匀

12．室温下孵育 10 分钟

13．小心抽去封阻液

14．重复实验步骤 11 至 13 二次

15．加入 500 微升通透液（Reagent E），混匀

16．室温下孵育 5 分钟

17．小心抽去通透液

18．加入 500 微升清理液（Reagent B），混匀

19．小心抽去清理液

20．重复实验步骤 18 至 19 一次

21．加入 100 微升染色液（Reagent F），混匀

22．室温下孵育 30 分钟，避免光照

23．小心抽去染色液

24．加入 100 微升复染液（Reagent G），混匀

25．室温下孵育 10 分钟，避免光照

26．小心抽去复染液

27．加入 500 微升清理液（Reagent B），混匀

28．小心抽去上清液

29．重复实验步骤 27 至 28 一次

30．加入 100 微升清理液（Reagent B），混匀

31．即刻移取 50 至 100 微升到洁净的载玻片上（注意：如果荧光强度偏弱，建议使用抗淬灭剂）

32．盖上盖玻片

33．即刻在（共聚焦）荧光显微镜下观察

观察绿色荧光—染色液（Reagent F）：滤波器激发波长 480nm，散发波长 530nm ――可见绿色荧光，表明皮质颗粒。

观察红色荧光—复染液（Reagent G）：滤波器激发波长 514nm，散发波长 603nm ――可见红色荧光，表明核染色体。

34．参考结果

注意事项

1． 本产品为20次操作

2． 操作时须戴手套

3． 染色完成后，即刻进行检测分析

4． 皮质颗粒参考图像如下：

5． 本公司提供系列发育生物学相关检测试剂产品

 质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定荧光清晰

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