革兰氏阴性细菌外膜囊泡荧光(FM4-64)定量检测试剂盒

主要用途

革兰氏阴性细菌外膜囊泡荧光（FM4-64）定量检测试剂是一种旨在通过亲脂性荧光染色剂 FM4-64，在膜结构中产生荧光，来定量检测细菌外膜囊泡含量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适宜于纯化细菌外膜囊泡的定量检测。产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。

技术背景

外膜囊泡（outer membrane vesicle；OMV）为含有周质内容物（包括外膜蛋白、DNA、RNA、脂多糖、脂质、周质蛋白、黏附素、免疫调节化合物等）的球形电子致密芽状体（spherical bud），细胞外间隔体，双层磷脂，20至200纳米大小，来自于革兰氏阴性细菌周边突起物的释放形成或胞外分泌产物，使之与环境或分子（例如DNA、RNA、蛋白质、内毒素、毒力因子等），保护细菌生存、结合和侵入，引起毒性，产生抗生素抗性等。外膜囊泡的产量取决于细菌生长周期、营养条件、温度、氧化应激状态等。病原菌的外膜囊泡10倍于非病原菌体。外膜囊泡具有疫苗开发中免疫调节潜力。FM4-64为亲脂性染料，可以整合进膜结构的脂质环境结构中，使之产生红色荧光（激发波长515nm。散发波长660nm）。据此测定细菌外膜囊泡的相对含量。

产品内容

缓冲液（Reagent A）

补充液（Reagent B）

染色液（Reagent C）

产品说明书

保存方式

保存在－20℃冰箱里，染色液（Reagent C），严格避免光照；有效保证 6 月。

用户自备

黑色 96 孔板：用于样品操作的容器

培养箱：用于染色孵育

荧光酶标仪：用于测定外膜囊泡荧光强度

实验步骤

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂放进冰槽里融化，避免光照；同时从－80℃冰箱里取出待测的线粒体，放进冰槽里融化。然后进行下列操作。

1． 准备 1 个黑色 96 孔板，标记好阴性对照孔、阳性对照孔和待测样品孔2． 分别加入 xx 微升缓冲液（Reagent A）

3． 移取 50 微升纯化外膜囊泡悬液（10 9细菌/毫升获得的 OMV 或总量为 200 微克细菌总蛋白获得的 OMV）到黑色 96 孔板的待测样品孔里（注意：用户需要调整好细菌量或细菌蛋白量）

4． 加入 xx 微升补充液（Reagent B）到黑色 96 孔板的阴性对照孔里

5． 加入 50 微升细菌混匀液（10 9 细菌/毫升）到黑色 96 孔板的阳性对照孔里（注意：仅用于阳性效果,）

6． 分别加入 xx 微升染色液（Reagent C）到上述所有孔里

7． 放进 37℃培养箱里孵育 15 分钟，避免光照

8． 直接放进荧光酶标仪：激发波长 515nm，散发波长 640nm――样品 RFU－阴性对照 RFU＝实际外膜囊泡（OMV） RFU：增高，表明外膜囊泡（OMV）含量高

注意事项

1． 本产品为 20 次操作

2． 操作时，须戴手套

3． 孵育时，须避免光照

4． 系统检测中，阳性对照只需一次

5． 如果样品 OMV 含量过高或过低，可以调整样品浓度

6． 建议染色完成后，即刻进行荧光分析

7． 含量表述：RFU/毫克细菌蛋白、RFU/毫升细菌数等

8． 本公司提供系列细菌外膜囊泡检测试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定荧光清晰

使用承诺

用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

说明书下载

如需要【革兰氏阴性细菌外膜囊泡荧光(FM4-64)定量检测试剂盒】电子版说明书及相关资料，请联系客服索取！

相关产品

更新时间：2020-12-15 12:00:51    作者：羽哚生物     点击：804次