革兰氏阴性细菌外膜囊泡制备试剂盒

主要用途

革兰氏阴性细菌外膜囊泡制备试剂是一种旨在使用差速离心，分离并收集所有细胞外膜囊泡的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于各种革兰氏阴性细菌外膜囊泡及其蛋白的纯化。产品即到即用，性能稳定，操作便捷，萃取产量和纯度皆佳。

技术背景

外膜囊泡（outer membrane vesicle；OMV）为含有周质内容物（包括外膜蛋白、DNA、RNA、脂多糖、脂质、周质蛋白、黏附素、免疫调节化合物等）的球形电子致密芽状体（spherical bud），细胞外间隔体，双层磷脂，20 至 200 纳米大小，来自于革兰氏阴性细菌周边突起物的释放形成或胞外分泌产物，使之与环境或宿主细胞进行反应，并调解各种功能，包括促进病理形成，调节细菌互动，转运各种信号分子（例如 DNA、RNA、蛋白质、内毒素、毒力因子等），保护细菌生存、结合和侵入，引起毒性，产生抗生素抗性等。外膜囊泡的产量取决于细菌生长周期、营养条件、温度、氧化应激状态等。病原菌的外膜囊泡 10 倍于非病原菌体。外膜囊泡具有疫苗开发中免疫调节潜力。通过差速离心和蛋白酶抑制混合剂，获得高纯外膜囊泡，充分保留其蛋白质的免疫和生物学活性。

产品内容

保存液（Reagent A）

溶解液（Reagent B）

活性液（Reagent C）

产品说明书

保存方式

保存活性液（Reagent C）在-20℃冰箱里，其余的保存在 4℃冰箱里，有效保证 6 月。

用户自备

50 毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

1.5 毫升离心管：用于样品保存的容器

分光光度仪：用于测定细菌浓度

台式离心机：用于样品操作

超速离心机：用于样品操作

恒温摇床：用于培养细菌细胞

0.45 微米滤膜：用于样品操作

真空浓缩装置：用于样品操作

实验步骤

实验开始前，将试剂盒里的活性液（Reagent C）从－20℃的冰箱里取出，置入冰槽里冻融，然后移出 xx毫升溶解液（Reagent B）到 1.5 毫升离心管，加入 xx 微升活性液（Reagent C），充分混匀，置于冰槽里，标记为溶解工作液。然后进行下列操作。

1． 准备好 1 毫升过夜培养的新鲜细菌样品

2． 移取 500 微升到 50 毫升细菌培养液（注意：用户可以进行诱导培养，例如无铁培养等）3． 放进 37℃恒温摇床孵育过夜，速度为 200RPM

4． 在分光光度仪上测 OD600 为 1（1 OD＝1 X 10 9细胞/毫升；总量为 5 X 10 10细胞）

5． 转移到预冷的 50 毫升锥形离心管

6． 放进 4℃台式离心机离心 30 分钟，速度为 5000g

7． 小心移取上清液到新的 50 毫升锥形离心管

8． 重复实验步骤 6 和 7 一次

9． 使用 0.45 微米滤膜真空过滤一次

10．（选择步骤）使用 100kD 蛋白临界点浓缩处理

11．放进 4℃超速离心机离心 3 小时，速度为 150000g

12．小心抽去上清液

13．加入 xx 微升预冷的保存液（Reagent A）

14．或加入 xx 微升预冷的含有溶解液（Reagent B）和活性液（Reagent C）的溶解工作液

15．用枪头上下抽吸，充分混匀

16．转移到到新的预冷的 1.5 毫升离心管

17．即刻放进－70℃冰箱里保存或置于冰冰槽里备用

18．进行后续蛋白定量、荧光定量或电镜检测等

注意事项

1． 本产品为 20 次（50 毫升菌液）操作

2． 所有操作须在 4℃状态下进行

3． 建议使用新鲜细菌接种，培养到指数生长阶段为理想状态

4． 活性液（Reagent C）避免反复冻融

5． 本产品按照 50 毫升培养菌液配制。如果操作不同菌液容量，可相应调整试剂用量

6． 根据菌种不同，50 毫升（OD600＝1）菌液可获得 5 至 100 微克外膜囊泡蛋白

7． 制备产物如果放在－70℃冰箱里储存备用，严格避免反复冻融

8． 本公司提供系列细菌试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定无蛋白酶污染

使用承诺

用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

说明书下载

如需要【革兰氏阴性细菌外膜囊泡制备试剂盒】电子版说明书及相关资料，请联系客服索取！

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更新时间：2020-12-15 12:00:51    作者：云羽生物     点击：760次