谷胱甘肽-S-转移酶(GSH-ST)活性终点比色法定量检测试剂盒

主要用途

谷胱甘肽-S-转移酶融合蛋白凝血酶酶切完全试剂是一种旨在通过凝血酶的特异作用序列，达到重组表达目标多肽与融合克隆载体的分离，而获得纯化目标蛋白，同时灭活凝血酶残留作用的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种 pGEX-T 表达载体上融合或标记在谷胱甘肽-S-转移酶上目标蛋白的分离纯化。产品即到即用，性能稳定，操作便捷，分离效率高。

技术背景

研究编码蛋白首先通过重组 DNA 技术在细菌中表达，其中谷胱甘肽-S-转移酶（GST）融合蛋白系统有效地帮助目的基因获得高表达的目标蛋白。目的基因被引入到细菌中高度表达的谷胱甘肽-S-转移酶基因，利用该基因的表达系统，避免了翻译过程中影响表达的各种因素，从而得到满意的表达产物。凝血酶（Thrombin）是一种内源性蛋白酶，将原纤维蛋白（fibrinogen）切离为纤维蛋白（fibrin），促进血液凝固。其切离序列为 LeuValProArgGlySer，出现在大多数表达载体，便于获取目标蛋白。

产品内容

缓冲液（Reagent A）

酶解液（Reagent B）

补充液（Reagent C）

终止液（Reagent D）

产品说明书

保存方式

保存酶解液（Reagent B）和终止液（Reagent D）在－20℃冰箱里，避免反复冻融；其余的保存在 4℃冰箱里；有效保证 6 月。

用户自备

1.5 毫升离心管：用于反应操作和保存样本的容器

平式摇荡仪：用于混匀反应物

微型台式离心机：用于沉淀反应物

实验步骤

实验开始前，准备好 GST 树脂纯化操作，直至洗脱处理前；同时将酶解液（Reagent B）从－20℃冰箱里取出，在冰槽里融化。然后进行下列操作。

1． 准备 1 个 1.5 毫升离心管

2． 移入已经含有目标蛋白结合处理的 GST 树脂（注意：未经洗脱处理）

3． 或直接使用刚刚操作的 GST 树脂（注意：未经洗脱处理）

4． 放进 4℃微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 3500g5． 小心抽去上清液

6． 加入 xx 微升缓冲液（Reagent A）

7． 加入 xx 微升酶解液（Reagent B）

8． 加入 xx 微升补充液（Reagent C）

9． 轻柔涡旋震荡 5 秒，混匀

10．放进 20℃恒温水槽孵育 16 小时

11．或平放在平式摇荡仪上，在 20℃温度下孵育 16 小时，速度为 50RPM

12．加入 xx 微升终止液（Reagent D）

13．放进 20℃恒温水槽孵育 15 分钟

14．放进 4℃微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 3500g

15．小心移取上清液到预冷的新的 1.5 毫升离心管

16．即刻放进－70℃冰箱里保存

17．或移取 2 至 5 微升进行 SDS-PAGE 电泳鉴定目标蛋白片段

注意事项

1． 本产品为 10 次操作

2． 操作时，须戴手套

3． 酶解液（Reagent B）避免反复冻融，建议分装

4． 酶解液（Reagent B）的切离能力取决于融合蛋白的三维结构、序列位置等各种因素；通常 10 微升即0.5 单位酶解液（Reagent B）可以切离 500 微克目标蛋白，其切离效率可达 95%

5． 增加切离能力的方法是：测试各种浓度的酶解液（Reagent B）、孵育温度（4 至 37℃）和孵育时间（2至 16 小时）

6． 避免样品中含有 PMSF、DTT、UREA 等

7． 避免过量使用酶解液（Reagent B）

8． 如果纯化效果欠佳，建议使用 PROTEASE（ GST 融合蛋白 PROTEASE 酶切试剂盒-30070.1）、或因子10a（ GST 融合蛋白因子 10a 酶切试剂盒-30070.3）等酶切

9． 本公司提供系列融合蛋白处理试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定分离效果满意

3． 本产品经鉴定不含有 HBsAg and HIV 抗原

使用承诺

用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

说明书下载

如需要【谷胱甘肽-S-转移酶(GSH-ST)活性终点比色法定量检测试剂盒】电子版说明书及相关资料，请联系客服索取！

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更新时间：2020-12-15 12:00:43    作者：羽哚生物     点击：545次