氨基萘三磺酸(ANTS)荧光辅助糖蛋白电泳(FACE)检测试剂盒

主要用途

氨基萘三磺酸（ANTS）标记荧光辅助糖分子电泳（FACE）检测试剂是一种旨在通过荧光探针氨基萘三磺酸和糖分子的末端醛基的结合，经过凝胶电泳显示的荧光条带，来识别和定量糖分子成分和丰度的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良传统方法、成功实验证明的。主要适用于各种寡聚糖的分离检测。产品即到即用，操作简捷，性能稳定，荧光清晰，高度敏感。

技术背景

荧光辅助糖分子电泳（Fluorophore Assisted Carbohydrate Electrophoresis；FACE）是一种通过荧光染料，标记在糖分子上，使用聚丙烯酰胺凝胶电泳，依据分子量的大小，高度分离寡聚糖糖分子，识别和定量寡聚糖中单糖分子的检测系统，以分析寡聚糖的特性、变化程度和单糖成分组成。氨基萘三磺酸（8-aminonaphthalene-1,3,6-trisulphonate；ANTS）是一种具有高度电荷的荧光染料（激发波长 320nm，散发波长 520nm），与糖分子的末端醛基（aldehyde）结合，便于在凝胶电泳上清晰显示，高度敏感，可以检测到 2 皮摩尔的糖分子。

产品内容

标记液（Reagent A）   5 管

稀释液（Reagent B）   500 微升

反应液（Reagent C）   5 管

溶解液（Reagent D）   500 微升

上样液（Reagent E）   1 毫升

胶体液（Reagent F）   150 毫升

凝结液（Reagent G）   4 毫升

促进液（Reagent H）   400 微升

上胶液（Reagent I）   15 毫升

电泳液（Reagent J）   250 毫升

产品说明书         1 份

保存方式

保存标记液（Reagent A）、反应液（Reagent C）和凝结液（Reagent G）在-20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在 4℃冰箱里；有效保证 6 月。

用户自备

1.5 毫升离心管：用于样品标记操作的容器

15 毫升锥形离心管：用于上胶体溶液配制的容器

50 毫升锥形离心管：用于胶体溶液配制的容器500 毫升烧杯：用于配制工作液的容器

无离子水：用于稀释试剂溶液

恒温水槽：用于反应孵育

离心浓缩仪：用于样品干燥

电泳仪：用于糖分子电泳分离

UV 自动成像仪或 PHOSPHORIMAGE：用于电泳染色记录和分析

实验步骤

一、 样品准备

1． 准备好待测样品：10 微克处理过的糖蛋白、10 至 50 微克处理过的淀粉或 30 皮摩尔寡聚糖

2． 如果检测糖蛋白中的寡聚糖分子，建议使用生物酶法分离寡聚糖分子

3． 如果检测糖蛋白或寡聚糖中的单糖分子，建议使用肼解法：即使用 2 摩尔 TFA 水解中性糖分子或使用

4 摩尔盐酸水解氨基糖分子

二、 荧光标记

实验开始前，从-20 冰箱里分别取出 1 管标记液（Reagent A）和反应液（Reagent C），置于室温下均衡。移取 20 微升稀释液（Reagent B）到标记液（Reagent A）管里，混匀，标记为标记工作液，避免光照；移取 40 微升溶解液（Reagent D）到反应液（Reagent C）管里，混匀，标记为反应工作液，避免光照。然后进行下列操作。

1． 移取 100 微升待测样品（20 至 50 微摩尔/升）到 1.5 毫升离心管

2． 放进离心浓缩仪离心干燥

3． 加入 5 微升标记工作液

4． 加入 5 微升反应工作液

5． 用 20 微升枪头抽吸混匀

6． 放进 37℃恒温水槽孵育 16 小时，避免光照

7． 放进离心浓缩仪离心干燥

8． 即刻加入 50 微升上样液（Reagent E），混匀

9． （选择步骤）如果暂时停止，可以保存在-70℃冰箱里

10．继续后续操作

三、 垂直电泳分析

1． 移出 30 毫升胶体液（Reagent F）到 50 毫升锥形离心管里（注意：根据胶体大小，调整试剂用量）

2． 加入 400 微升凝结液（Reagent G）（注意：如果凝结过快，可以适量减少凝结液（Reagent G）或将胶体液（Reagent F）置于 4℃冰箱里预冷）

3． 加入 60 微升促进液（Reagent H）

4． 混匀后，即刻移入玻璃槽，避免气泡

5． 在室温下孵育 45 分钟，或直至胶体凝结

6． 移出 3 毫升上胶液（Reagent I）到 15 毫升锥形离心管里

7． 加入 70 微升凝结液（Reagent G）（注意：如果凝结过快，可以适量减少凝结液（Reagent G）或将上胶液（Reagent I）置于 4℃冰箱里预冷）

8． 加入 10 微升促进液（Reagent H）

9． 混匀后，即刻移入玻璃槽，避免气泡

10．插入 10 孔梳

11．在室温下孵育 45 分钟，或直至胶体凝结

12．移取 100 毫升电泳液（Reagent J）到 1000 毫升容器里，加入 900 毫升用户自备的无离子水，混匀后，标记为电泳工作液

13．加入适量的电泳工作液到电泳槽里

14．拔出 10 孔梳

15．用 20 微升枪头清洗样品孔槽

16．上样：10 微升（注意：20 皮摩尔/微升或以上；如果信号过强或过弱，调整上样量）

17．在 4℃环境下电泳 3 小时，稳定电流为 12 毫安，直至紫红色荧光染料移动到分离胶体底部上 1 至 2 厘米处

18．拆除电泳装置，取出电泳玻璃板块

19．分离玻璃板快，切除胶顶

20．即刻置于 UV 自动成像仪或 PHOSPHORIMAGE 下成像记录，并测算条带荧光强度

21．根据已知标准对照的上样浓度和荧光强度，计算样品的寡聚糖或单糖含量和相对丰度（relativeabundance）

1） 单糖浓度

[（待测样品荧光强度 X 样品稀释倍数）÷已知标准样品荧光强度] X 已知标准样品上样浓度（皮摩尔/微升）

2） 单糖含量

根据单糖分子量换算成微克

3） 寡聚糖

累加所有单糖的含量得出糖蛋白中的寡聚糖总量

4）计算百分比

注意事项

1． 本产品为 5 次操作（包括 20 次标记，5 次电泳）

2． 操作时，须戴手套

3． 建议样品上样量为 200 皮摩尔/10 微升

4． 标记工作液和反应工作液配制后，可以保存在-70℃冰箱里 2 周；使用前，如果有结晶析出，可以温育溶解

5． 用户可以使用牛胎球蛋白（bovine fetuin）作为糖蛋白标准阳性对照

6． 用户可以使用甘露糖（mannose）、甘露四糖（mannotetraose）、甘露五糖（mannopentaose）、甘露六糖（mannohexaose）、甘露七糖（mannoheptaose）、岩藻糖（fucose）、半乳糖（galactose）、麦芽糖（maltose）、麦芽三糖（maltotriose）、麦芽四糖（maltotetrose）、麦芽七糖、葡萄糖（glucose）等任何一个或不同分子量组合作为单糖分子标准阳性对照

7． 如果检测糖胺聚糖（glycosaminoglycan），包括透明质酸（hyaluronan）、硫酸软骨素（chondroitin sulfate）、硫酸乙酰肝素（heparan sulfate）等，建议使用氨基萘三磺酸（ANTS）荧光辅助透明质酸和硫酸软骨素二糖分子电泳（FACE）检测试剂盒——30146 和氨基萘三磺酸（ANTS）荧光辅助硫酸乙酰肝素二糖分子电泳（FACE）检测试剂盒——30147

8． 通常恒定电流 12 毫安运行 2 至 4 小时；30 毫安运行 1 至 2 小时，但是胶体大小等因素会影响实际运行时间；建议根据示踪染料的位置决定是否终止电泳

9． 通常电泳的电压变化由 100 伏至 1000 伏范围

10．参考图像如下：(左侧泳道为标准样品包括麦芽七糖、六糖、四糖、三糖、二糖、一糖等；右侧泳道为淀粉酶水解后的糖分子样品

11．本公司提供系列糖蛋白分析试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定荧光清晰

使用承诺

用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

说明书下载

如需要【氨基萘三磺酸(ANTS)荧光辅助糖蛋白电泳(FACE)检测试剂盒】电子版说明书及相关资料，请联系客服索取！

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更新时间：2020-12-15 12:00:42    作者：羽哚生物     点击：731次