动物组织氧化应激活性氧(ROS)光泽精化学发光法定量检测试剂盒

主要用途

动物组织氧化应激活性氧（ROS）光泽精化学发光法定量检测试剂是一种旨在通过使用自由基探针光泽精，捕获动物细胞中的活性氧族，使发光物氧化降解并发光，在化学发光仪（Luminometer）的帮助下定量检测动物组织活性氧族（超氧自由基阴离子）的生成和数量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种动物和人体组织的活性氧族的检测。可以被用于细胞凋亡、衰老、代谢和营养学，以及发育生物学（男性不育）等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，性能稳定，检测敏感。

技术背景

超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2 -）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡，甚而导致诸如男性不育、冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。光泽精（lucigenin），又称硝酸双-N-甲基吖啶翁（bis-N-methylacridinium nitrate），是一种带正电荷的发光剂，单价还原后生成光泽精自由基，再与超氧自由基阴离子反应生成不稳定的中间物光泽精二恶二酮，由此分解成电激发状态（N-甲基丫啶酮），通过释放光子，回复到基态。光泽精作为探针，可以特异性检测组织细胞超氧自由基阴离子，其发光强度与超氧自由基阴离子水平成正相关。

产品内容

清理液（Reagent A）        220 毫升

强化液（Reagent B）        1 毫升

发光液（Reagent C）        1 毫升

产品说明书            1 份

保存方式

保存强化液（Reagent B）和发光液（Reagent C）在－20℃冰箱里，严格避免光照；其余的保存在 4℃冰箱里；有效保证 6 月。

用户自备

15 毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

1.5 毫升离心管：用于样品操作和保存的容器

DOUNCE 匀浆器：用于裂解组织样品

超声仪：用于裂解组织样品

（微型）台式离心机：用于样品操作

测试管或黑色 96 孔板：用于发光检测用的容器化学发光仪：用于检测化学发光

实验步骤

一、 样品预处理

1． 手术取出动物组织，并秤重以确定组织重量

2． （选择步骤）放进预冷的 15 毫升锥形离心管（200 毫克组织）

3． （选择步骤）加入 3 毫升清理液（Reagent A）

4． （选择步骤）小心抽去清理液（Reagent A）

5． 放进一个 15 毫升锥形离心管

6． 加入置于冰槽里的 1 毫升清理液（Reagent A）

7． 即刻放入预冷的 DOUNCE 匀浆器

8． 在冰槽里用研磨棒匀化组织（约 80 下）

9． 将所有组织匀浆物移入 15 毫升锥形离心管

10．强力涡旋震荡 5 秒，充分混匀

11．（选择步骤）在冰槽里，置于 200 瓦超声仪下，功率 50％，猝击 5 秒

12．转移到预冷的 1.5 毫升离心管

13．放进 4℃微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 3000g（或 6000RPM，例如 eppendorf 5415）

14．小心移取 1 毫升上清液到新的预冷的 1.5 毫升离心管

15．（选择步骤）移取 5 微升进行蛋白定量测定，并调整蛋白浓度为 20 毫克/毫升（注意：建议使用 Bradford蛋白质浓度定量试剂盒－30030.1）

16．置于冰槽里继续后续操作（1 小时内）

二、 测读

测读开始前，打开化学发光仪，设定仪器内温度为 37℃预热和整合测读 1 秒；然后关掉实验室的灯光。将－20℃冰箱里的试剂置入冰槽里融化，严格置于暗室里。然后进行下列操作。

1． 准备好测试管，做好标记：阴性对照、样品本底和样品活性

2． 移取 400 微升清理液（Reagent A）到阴性对照测试管

3． 移取 400 微升上述预处理的待测样品到样品本底测试管

4． 移取 400 微升上述预处理的待测样品到样品活性测试管

5． 分别加入 10 微升强化液（Reagent B）到上述测试管，除样品本底测试管外

6． 分别加入 10 微升发光液（Reagent C）到上述测试管，除样品本底测试管外

7． 轻轻涡旋混匀

8． 即刻放进 37℃化学发光仪里测读（注意：建议瞬时测读或孵育 60 秒即刻测读）

9． 整合测读 1 秒，获得相对发光单位（relative light unit；RLU）

10．或者测读光电子读数：X 10 6 CPM（counted photon per minute）（注意：可以使用液体闪烁仪替代）

11．计算 ROS 水平：

【（样品活性－样品本底）—阴性对照】 ÷ 0.4（毫升；样品容量） ＝相对发光单位（RLU） / 毫升＝相对发光单位（RLU）/20 毫克＝X 10 6 CPM/毫升＝X 10 6CPM/20 毫克

2注意事项

1． 本产品为 50 次操作

2． 如果测定体系变化，则试剂用量相应变化

3． 操作时，须戴手套

4． 测试前，动物组织须新鲜收集，1 小时内为最佳

5． 组织裂解悬液制备后即刻测读，不宜过夜保存

6． 组织裂解悬液须清澈

7． 测读的所有步骤均须在暗室里进行

8． 根据活性氧值浓度高低，用户可以调整样品量

9． 如果是注射式化学发光仪，建议测试前后使用无离子水冲洗化学发光仪注射（injector）管道

10．本公司提供系列活性氧分析试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定检测敏感

使用承诺

用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

说明书下载

如需要【动物组织氧化应激活性氧(ROS)光泽精化学发光法定量检测试剂盒】电子版说明书及相关资料，请联系客服索取！

相关产品

更新时间：2020-12-15 12:00:38    作者：羽哚生物     点击：869次