动物细胞氧化应激活性氧(ROS)鲁米诺化学发光法定量检测试剂盒

主要用途

动物细胞氧化应激活性氧（ROS）鲁米诺化学发光法定量检测试剂是一种旨在通过自由基探针鲁米诺和强化剂的参与下，细胞样品中的活性氧族使发光物氧化降解并发光，在化学发光仪（Luminometer）的帮助下定量检测样品中活性氧族（过氧化氢）的生成和数量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种动物和人体细胞的活性氧族的检测。可以被用于细胞凋亡、衰老、代谢和营养学，以及发育生物学（男性不育）等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，性能稳定，检测敏感。

技术背景

超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2 -）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，甚而导致诸如男性不育、冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。鲁米诺（luminol），又称氨基邻苯二甲酰肼（luminol；3-aminophthalic hydrazide 5-amino-2,3-dihvdro- 1,4-phthalazinedione），是一种脂溶性的发光剂，氧化后生成鲁米诺自由基而化学发光，具有460nm左右峰值的带状光谱，肉眼可观察到鲜明的紫蓝色。鲁米诺以单价氧化形式与超氧自由基阴离子反应，产生不稳定性内过氧化物或二氧环丁烷（Dioxetane），由此分解成电激发状态，通过释放光子，回复到基态。鲁米诺作为探针，可以检测细胞中过氧化氢、超氧自由基阴离子和羟自由基，其中过氧化氢最强，其发光强度与过氧化氢水平成正相关。

产品内容

清理液（Reagent A）

强化液（Reagent B）

发光液（Reagent C）

产品说明书

保存方式

保存强化液（Reagent B）和发光液（Reagent C）在－20℃冰箱里，严格避免光照；其余的保存在 4℃冰箱里；有效保证 6 月

用户自备

15 毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

1.5 毫升离心管：用于样品操作的容器

微型台式离心机：用于去除样品杂质

超声仪：用于裂解细胞样品

测试管或黑色 96 孔板：用于发光检测用的容器

化学发光仪：用于检测化学发光实验步骤

一、 样品预处理

（1）完整细胞样品

1． 准备 1 瓶 75cm2细胞培养瓶的新鲜待测细胞

2． 小心抽去细胞培养液

3． 使用细胞刮脱棒刮脱细胞

4． 移入到 15 毫升锥形离心管

5． 放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 300g

6． 小心抽去上清液

7． 加入 xx 毫升 4℃预冷的 清理液（Reagent A），混匀细胞

8． 转移到 4℃预冷的 2 毫升离心管

9． 放进 4℃微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 400g（或 2000RPM，例如 eppendorf 5415）

10．小心抽去上清液

11．加入适量的清理液（Reagent A）

12．充分混匀后，在血细胞计数器上进行细胞计数

13．调整细胞数为 20 X 10 6 /毫升

14．放进 37℃培养箱里备用（1 小时内）

（2）裂解细胞样品

1． 准备好 1 瓶 75cm2细胞培养瓶的新鲜待测细胞

2． 小心抽去培养液

3． 使用细胞刮脱棒轻柔刮脱细胞

4． 加入 xx 毫升清理液（Reagent A），混匀细胞

5． 在血细胞计数器上进行细胞计数

6． 调整细胞数为 20 X 10 6 /毫升

7． 移入到预冷的 15 毫升锥形离心管（注意：悬浮细胞从这一步骤开始）

8． 放进 4℃台式离心机离心 5 分钟，速度为 300g

9． 小心抽去上清液

10．加入 xx 毫升清理液（Reagent A），充分混匀

11．在冰槽里，置于 200 瓦超声仪下，功率 50％，猝击 5 秒，重复一次

12．转移到预冷的 1.5 毫升离心管

13．强力涡旋震荡 15 秒

14．放进 4℃微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 3000g（或 6000RPM，例如 eppendorf 5415）

15．小心移取 1 毫升上清液到新的预冷的 1.5 毫升离心管

16．（选择步骤）移取 5 微升进行蛋白定量测定（注意：建议使用 Bradford 蛋白质浓度定量试剂盒－30030.1）

17．置于冰槽里继续后续操作（1 小时内）

二、 测读

测读开始前，打开化学发光仪，设定仪器内温度为 37℃预热和整合测读 10 秒或 15 分钟；然后关掉实验室的灯光。将－20℃冰箱里的试剂置入冰槽里融化，严格置于暗室里。然后进行下列操作。

1． 准备好测试管，做好标记：阴性对照、样品本底和样品活性

2． 移取 xx 微升清理液（Reagent A）到阴性对照测试管

3． 移取 400 微升上述预处理的待测样品到样品本底测试管

4． 移取 400 微升上述预处理的待测样品到样品活性测试管

5． 分别加入 xx 微升强化液（Reagent B）到上述测试管，除样品本底测试管外

6． 分别加入 xx 微升发光液（Reagent C）到上述测试管，除样品本底测试管外

7． 轻轻涡旋混匀

8． 即刻放进 37℃化学发光仪里测读

9． 整合测读 10 秒，获得相对发光单位（relative light unit；RLU）

10．或者整合测读 15 分钟，获得光电子读数：X 10 6 CPM（counted photon per minute）（注意：可以使用液体闪烁仪替代）

11．计算 ROS 水平：公式参考随货纸质版说明书。

注意事项

1． 本产品为 50 次操作

2． 操作时，须戴手套

3． 测试前，动物细胞须新鲜收集，1 小时内为最佳

4． 细胞裂解悬液制备后即刻测读，不宜过夜保存

5． 细胞裂解悬液须清澈

6． 如果测定体系变化，则试剂用量相应变化

7． 系统操作过程中，阴性对照只需测定一次

8． 测读的所有步骤均须在暗室里进行

9． 根据活性氧值浓度高低，用户可以调整样品量

10．必要时，例如活性氧族过低，可以浓缩样品处理

11．如果是注射式化学发光仪，建议测试前后使用无离子水冲洗化学发光仪注射（injector）管道

12．本公司提供系列活性氧分析试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定检测敏感

使用承诺

用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

说明书下载

如需要【动物细胞氧化应激活性氧(ROS)鲁米诺化学发光法定量检测试剂盒】电子版说明书及相关资料，请联系客服索取！

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更新时间：2020-12-15 12:00:37    作者：羽哚生物     点击：900次