动物单核白细胞/淋巴细胞分离试剂盒

主要用途

动物血液单核白细胞/淋巴细胞分离试剂是一种旨在通过聚糖和泛影葡胺混合液，达到特定比重，然后离心分层以获得纯化完整的单核白细胞/淋巴细胞的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。可以被用于动物（大鼠、小鼠等）单核白细胞/淋巴细胞的分离、鉴定、染色、标记、培养、DNA萃取、线粒体分离、细胞因子测定和细胞流式仪分析等研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，分离出色，性能稳定，细胞活性保证。

技术背景

全血溶液含有血清、各种蛋白因子、无核血红细胞、血小板、多核白细胞和单核白细胞等。为了获得纯化完整的单核白细胞/淋巴细胞，采用Boyum（1968）的比重（1.083克/毫升）离心技术，可以方便快速地从全血和骨髓中分离。

产品内容

分离液（Reagent A）        50 毫升

产品说明书            1 份

保存方式

保存在 4℃冰箱里，有效保证 6 月。

用户自备

PBS 缓冲溶液（12033）：用于清洗淋巴细胞

淋巴细胞完全培养液（12137.1）：用于分离后淋巴细胞的培养

白细胞冻存液（10001.2）：用于分离后淋巴细胞的长期保存

15 毫升锥形离心管：用于细胞操作的容器

50 毫升锥形离心管：用于细胞操作的容器

2 毫升无菌塑料吸管：用于抽吸淋巴细胞层液体

台式离心机：用于沉淀细胞

实验步骤

实验开始前，室温预热分离液（Reagent A）。然后进行下列操作。

1． 准备 1 个无菌的 15 毫升锥形离心管

2． 加入 5 毫升分离液（Reagent A）

3． 小心沿着管壁，接近分离液层面，非常缓慢地加入新鲜的 EDTA 抗凝的全血样品在分离液（Reagent A）上面（注意：切记不要搅浑分离液（Reagent A））

4． 小心放进台式离心机离心 30 分钟，速度为 1500g（注意：建议离心机设置加速和制动均为零）

5． 小心取出离心管，切记不要震动

6． 可见：最上层为血浆（为淡红色通明），其次为薄薄的致密白色环状层（Buffy Coat），然后为离心液层，最后为红色沉淀在管底的红细胞层

7． 小心抽掉白色环状层以上三分之二血浆液，切记不要搅动白色环状层

8． 用 2 毫升无菌塑料吸管小心吸取白色环状层液体

9． 移入到新的无菌的 50 毫升锥形离心管

10．加入 48 毫升用户自备的 PBS 缓冲溶液

11．轻柔上下倾倒混匀

12．放进台式离心机离心 10 分钟，速度为 200g

13．小心倒掉上清液

14．用手指轻弹离心管 2 至 3 下，使白细胞颗粒群松动

15．（选择步骤）加入 5 毫升用户自备的淋巴细胞完全培养液，进行细胞培养

16．（选择步骤）或加入 1 毫升用户自备的白细胞冻存液，放进－80℃冻存

17．（选择步骤）或即刻进行各种后续实验（包括白细胞分离、鉴定、染色、标记、DNA 萃取、线粒体分离、细胞因子测定和细胞流式仪分析等）

注意事项

1． 本产品为 10 次操作（5 毫升全血/次）

2． 所有操作均须无菌状态下进行

3． 操作时，须戴手套

4． 操作时，在室温下进行

5． 操作时，切莫污染母液

6． 建议使用新鲜全血

7． 全血样品采集须使用血液抗凝液

8． 如果血液出现凝块，不宜进行分离操作

9． 全血样品和分离液（Reagent A）的使用比例为 1：1，即 1 毫升全血，加 1 毫升分离液（Reagent A）；如需要增加或减少全血量，则按比例相应增加或减少分离液（Reagent A）

10．本产品细胞回收率 70％以上，细胞存活率 98％以上

11．本公司提供系列血液研究试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定细胞活性保证

说明书下载

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更新时间：2020-12-15 12:00:34    作者：羽哚生物     点击：548次