纯化线粒体磷氧比(ADP/O)定量检测试剂盒

主要用途

纯化线粒体磷氧比（ADP/O）定量检测试剂是一种旨在通过极谱法检测系统（polarographic system）测定新鲜活体线粒体在已知浓度 ADP 存在（III 态呼吸）的情况下氧浓度的降低，来分析磷氧比（P：O ratio），以评价线粒体呼吸链和氧化磷酸化偶联程度，即能量转化效率的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。可以被用于线粒体生理功能和药物作用机制等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，活体检测，性能稳定。

技术背景

线粒体是细胞呼吸链和氧化磷酸化的中心。电子传递和ATP合成通过质子梯度偶联成一体，即线粒体的呼吸耗氧偶联着ADP与Pi合成ATP的磷酸化反应。线粒体每吸收一克原子氧的同时，生长ATP（ADP磷酸化）的克分子数的比值，为ADP/O值。线粒体的磷氧比直接表征线粒体呼吸耗氧和ATP合成的关系。正常线粒体的ADP/O（P/O）为1.5：磷氧比降低意味着线粒体解偶联；磷氧比增高意味着线粒体偶联良好。其最大值为3.3。

产品内容

介质液（Reagent A）

底物液（Reagent B）

产品说明书

保存方式

保存在－20℃冰箱里，有效保证 6 月。

用户自备

CLARK 氧电极仪：用于测定溶解氧浓度

实验步骤

实验开始前，制备好新鲜的线粒体置于冰槽里备用；同时将－20℃冰箱里的试剂融化，并预热氧电极仪到25℃。然后进行下列操作。

1． 加入 xx 毫升介质液（Reagent A）到反应玻璃槽

2． 使用微型磁力子搅拌，充分混匀

3． 密封反应槽

4． 开始记录氧浓度：起始饱和氧浓度值为 0.240 微摩尔分子氧/毫升（25℃）

5． 持续记录 1 分钟后，注射加入 20 微升待测的线粒体（总量 2 毫克）（注意：氧浓度可能瞬时变化）

6． 持续记录 1 分钟后，注射加入 xx 微升 底物液（Reagent B）（注意：氧浓度在 10 秒钟内开始下滑；参见注意事项 9）7． 持续记录直至出现线性下行斜线出现拐点

8． 继续注射加入 xx 微升 底物液（Reagent B）（注意：氧浓度在 10 秒钟内开始下滑）

9． 持续记录直至出现线性下行斜线出现拐点

10．测算氧浓度降低值（微摩尔/毫升）：公式参考随货纸质版说明书。

11．计算 ADP/O：公式参考随货纸质版说明书。

注意事项

1． 本产品为 20 次操作

2． 操作时，须戴手套

3． 确保反应玻璃槽洁净，密闭，以免氧气流入

4． 线粒体样品须新鲜制备，建议不要冻存；制备的线粒体膜须完整，非常重要；建议使用线粒体分离试剂盒－10006.1

5． 注射加入反应槽时，避免气泡和空气注入

6． 避免乙醇污染；乙醇增加氧浓度；如果底物或抑制剂须使用乙醇溶解，则加注 10 微升

7． 保持反应槽温度恒定，温度降低，氧浓度升高

8． 反应液充分混匀，和环境氧保持平衡

9． 加注 底物液（Reagent B）前，须充分冻融和混匀

10．严格按照规定加注试剂，切莫增加加注试剂容量

11．氧浓度百分值转换为微摩尔/毫升：

公式=【测定值（百分值）÷20.9%（环境标准氧百分值）】X 0.237（系数；微摩尔/毫升）

12．本公司提供系列线粒体检测试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定检测敏感

使用承诺

用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

说明书下载

如需要【纯化线粒体磷氧比(ADP/O)定量检测试剂盒】电子版说明书及相关资料，请联系客服索取！

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更新时间：2020-12-15 12:00:33    作者：羽哚生物     点击：709次