纯化线粒体氧化应激活性氧(ROS)光泽精化学发光法定量检测试剂盒

主要用途

纯化线粒体氧化应激活性氧（ROS）光泽精化学发光法定量检测试剂是一种旨在通过使用自由基探针光泽精，捕获线粒体中的活性氧族，使发光物氧化降解并发光，在化学发光仪（Luminometer）的帮助下定量检测纯化线粒体活性氧族（超氧自由基阴离子）的生成和数量的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适用于各种生物体线粒体组分的活性氧族的检测。可以被用于细胞凋亡、衰老、代谢和营养学等的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，性能稳定，检测敏感。

技术背景

超氧自由基阴离子（superoxide radical；O2 -）、过氧化氢（hydrogen peroxide；H2O2）、羟自由基或氢氧基（hydroxyl radical；OH-）、过氧化基（peroxyl radical；ROO-）、氢过氧自由基（hydroperoxyl；HOO）、烷氧自由基（alcoxyl radical）、氮氧基（nitric Oxide；NO-）、过氧亚硝基阴离子（peroxynitrite anion；ONOO-）次氯酸（hypochlorous acid；HOCl）、半醌自由基（semiquinone radical）、单线态氧气（singlet oxygen）等细胞内活性氧族（Reactive Oxygen Species；ROS）的产生和增多，将导致细胞衰老或凋亡，甚而导致诸如男性不育、冠心病、风湿性关节炎、肿瘤、退行性病变等各种病理状况。线粒体是真核细胞的膜性细胞器，是产生活性氧、进行氧化还原反应的重要场所。光泽精（lucigenin），又称硝酸双-N-甲基吖啶翁（bis-N-methylacridinium nitrate），是一种带正电荷的发光剂，单价还原后生成光泽精自由基，再与超氧自由基阴离子反应生成不稳定的中间物光泽精二恶二酮，由此分解成电激发状态（N-甲基丫啶酮），通过释放光子，回复到基态。光泽精作为探针，其正电荷与线粒体内膜上的负电荷作用，可以特异性检测线粒体超氧自由基阴离子，其发光强度与超氧自由基阴离子水平成正相关。

产品内容

缓冲液（Reagent A）        60 毫升

发光液（Reagent B）        1 毫升

产品说明书            1 份

保存方式

保存在－20℃冰箱里，发光液（Reagent B）严格避免光照；有效保证 6 月。

用户自备

1.5 毫升离心管：用于线粒体样品操作的容器

恒温水槽：用于样品孵育

测试管或黑色 96 孔板：用于发光检测用的容器

化学发光仪：用于检测化学发光

实验步骤一、 样品预处理

1． 移取 100 微升新鲜制备（2 小时内）的纯化线粒体（400 微克线粒体蛋白）到预冷的 1.5 毫升离心管，置于冰槽里

2． 加入 700 微升缓冲液（Reagent A），轻轻混匀线粒体

3． 放进 37℃恒温水槽孵育 10 分钟

4． 加入 10 微升用户自备的待测药品

5． 即刻进入下列测读操作

二、 测读

测读开始前，打开化学发光仪，设定仪器内温度为 37℃预热和整合测读 10 秒或 15 分钟；然后关掉实验室的灯光。将－20℃冰箱里的发光液（Reagent B）置入冰槽里融化，严格置于暗室里。然后进行下列操作。

1． 准备好测试管，做好标记：阴性对照、样品本底和样品活性

2． 移取 400 微升缓冲液（Reagent A）到阴性对照测试管

3． 移取 400 微升上述预处理的线粒体到样品本底测试管

4． 移取 400 微升上述预处理的线粒体到样品活性测试管

5． 分别加入 10 微升发光液（Reagent B）到上述测试管，除样品本底测试管外

6． 轻轻混匀

7． 即刻放进 37℃化学发光仪里测读

8． 整合测读 10 秒，获得相对发光单位（relative light unit；RLU）

9． 或者整合测读 15 分钟，获得光电子读数：X 10 6 CPM（counted photon per minute）（注意：可以使用液体闪烁仪替代）

10．计算 ROS 水平：

（样品活性－样品本底） ÷ 0.4（毫升；样品容量） ＝相对发光单位（RLU） / 毫升或相对发光单位（RLU）/200 微克线粒体蛋白

注意事项

1． 本产品为 50 次操作

2． 如果测定体系变化，则试剂用量相应变化

3． 操作时，须戴手套

4． 测试前，线粒体分离后 2 小时内为最佳

5． 线粒体悬液须在 4℃温度下保存备用

6． 测读的所有步骤均须在暗室里进行

7． 如果是注射式化学发光仪，建议测试前后使用无离子水冲洗化学发光仪注射（injector）管道

8． 本公司提供系列活性氧分析试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

22． 本产品经鉴定检测敏感

使用承诺

用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

说明书下载

如需要【纯化线粒体氧化应激活性氧(ROS)光泽精化学发光法定量检测试剂盒】电子版说明书及相关资料，请联系客服索取！

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更新时间：2020-12-15 12:00:31    作者：羽哚生物     点击：475次