纯化线粒体膜通道孔(MPTP)红色荧光(TMRM)检测试剂盒

主要用途

纯化线粒体膜通道孔（MPTP）红色荧光（TMRM）检测试剂是一种旨在通过四甲基罗丹明甲酯染料，选择性地聚集在线粒体内呈现荧光染色，一旦释放出线粒体，其荧光性显著降低，来分析和观察线粒体膜通道孔活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种纯化线粒体膜通道孔活性（瞬时或长期开放状态）的检测。产品严格无菌，即到即用，活体检测，分辨率高，操作简捷，性能稳定。

技术背景

线粒体膜通道孔（mitochondrial permeability transition pore；MPTP）是由线粒体内外膜成分构成的非特异性且钙离子依赖性通道。在细胞凋亡或坏死时，线粒体内容物通过膜通道孔释放到胞浆中。膜通道孔的开放，显著改变线粒体的通透性。钙离子过度进入、线粒体谷胱苷肽的氧化和活性氧族水平的增加等导致膜通道孔的持续开放，而造成细胞色素 C 的释放和线粒体膜电位的消失。四甲基罗丹明甲酯（tetramethylrhodaminemethyl ester；TMRM），为罗丹明衍生物阳离子染料，作为电势测定（potentiometric）荧光探针：第一，具有亲脂性的； 第二，与线粒体内膜负电极结合而聚集；第三，容易进入细胞及其线粒体。四甲基罗丹明甲酯进入细胞后，被细胞内酯酶切离，产生四甲基罗丹明。四甲基罗丹明进入线粒体后，被线粒体俘获，呈现强烈荧光。一旦线粒体膜通道孔开放，四甲基罗丹明释放出来，其荧光性显著降低。线粒体内荧光的变化，表明膜通道孔的开放状态。

产品内容

染色液（Reagent A）        25 微升

稀释液（Reagent B）        500 微升

保存液（Reagent C）        10 毫升

产品说明书            1 份

保存方式

保存染色液（Reagent A）在－20℃冰箱里，避免光照；其余的保存在 4℃冰箱里；有效保证 6 月。

用户自备

黑色 96 孔板：用于线粒体荧光分析的容器

1.5 毫升离心管：用于线粒体染色的容器

载波片/盖玻片：用于线粒体样品存放后荧光分析

微型台式离心机：用于沉淀线粒体

培养箱：用于染色孵育

（共聚焦）荧光显微镜：用于线粒体荧光分析

荧光分光光度仪或荧光酶标仪：用于线粒体荧光定量分析

实验步骤

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent A）融化，稀释液（Reagent B）放进 37℃恒温水槽里预热。然后移出 1 微升染色液（Reagent A）到新的 1.5 毫升离心管，加入 10 微升稀释液（ReagentB），混匀后，标记为染色工作液，放在暗室里。然后进行下列操作。

1． 准备好待测的纯化线粒体样品

2． 移取 100 微升线粒体样品（总量为 1 毫克）到 1.5 毫升离心管

3． 加入 10 微升染色工作液，混匀

4． 放进 37℃细胞培养箱里孵育 20 分钟，避免光照

5． 放进 4℃微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）

6． 小心抽去上清液

7． 加入 200 微升 37℃预热的保存液（Reagent C），混匀颗粒群

8． 放进 4℃微型台式离心机离心 5 分钟，速度为 16000g（或 13000RPM，例如 eppendorf 5415）

9． 小心抽去保存液（Reagent C）

10．小心加入 100 微升 37℃预热的保存液（Reagent C），混匀颗粒群

11．选择下列方式之一进行操作：

（A）使用（共聚焦）荧光显微镜观察（定性检测）：

1）移取 10 微升上述悬液到载波片上，盖上盖玻片

2）激发波长 540nm，散发波长 580nm――

红色荧光减弱，表明膜通道孔活性（MPTP）增强

（B） 或使用荧光分光光度仪或荧光酶标仪检测（定量检测）：

1）移取 100 微升上述悬液到 100 微升比色杯或黑色 96 孔板

2）即刻放进荧光分光光度仪或荧光酶标仪：激发波长 540nm，散发波长 580nm――RFU 降低，表明膜通道孔活性（MPTP）增强

注意事项

1． 本产品为 20 次操作

2． 操作时，须戴手套

3． 染色前，所有试剂溶液，除染色液（Reagent A）外，需 37℃预热

4． 建议染色完成后，即刻进行荧光检测分析

5． 孵育时，必须避免光照

6． 可以使用±10nm 波长的滤波器

7． 如果膜通道孔为瞬时开放（transient），则荧光缓慢且自发降低

8． 本公司提供膜通道孔抑制剂： 0.2 毫摩尔环胞素 A（cyclosporine A）－12226，维护荧光完整

9． 本公司提供系列线粒体分析试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定荧光清晰

使用承诺

2用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

说明书下载

如需要【纯化线粒体膜通道孔(MPTP)红色荧光(TMRM)检测试剂盒】电子版说明书及相关资料，请联系客服索取！

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更新时间：2020-12-15 12:00:30    作者：羽哚生物     点击：830次