真菌/酵母细胞细胞壁分离试剂盒说明书

主要用途 

酵母细胞壁分离试剂是一种旨在使用化学和物理方法相结合，快速且充分裂解酵母细胞壁，通过反复清洗，萃取完整而纯化的可溶性细胞壁成分的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。可直接用于后续多糖或糖蛋白分离、胞壁结构分析、单体成分定量等。产品即到即用，性能稳定，操作便捷，萃取效果好。

技术背景

酵母细胞壁在细胞生长和分裂时，决定着细胞的形态和完整性。酵母细胞壁是一种动力结构，由多糖和蛋白，例如葡聚糖（glucan）、甘露聚糖（mannan）、 甲壳素（chitin）等构成的超分子网络，适应酵母生理和形态变化，包括单倍体细胞接合（conjugation）、孢子形成（sporulation）或假菌丝形态（pseudohyphal growth）等。酵母细胞壁的分离通常采用化学法和生物酶解法，从而获得完整或特异的胞壁成分。

产品内容

清理液（Reagent A）                             550 毫升

平衡液（Reagent B）                             250 毫升

酸珠液（Reagent C）                             2 毫升

  净化液（Reagent D）                          50  毫升

保存液（Reagent E）                             10  毫升

产品说明书                                               1 份

保存方式

保存在 4℃冰箱里, 有效保证 6 月

用户自备

50 毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

15 毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

1.5 毫升离心管：用于样品操作和保存的容器

（微型）台式离心机：用于样品操作分光光度仪：用于测定酵母细胞浓度涡旋震荡仪：用于裂解酵母细胞壁

实验步骤 

1. 准备好 50 毫升新鲜酵母样品（注意：通过选择性培养液培养获得酵母细胞）。

2. 在分光光度仪上测定OD600（注意：建议达到 1 OD，即 1 X 107细胞/毫升；总量为 5 X 108细胞）。

3. 转移到预冷的 50 毫升锥形离心管。

4. 放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 3000g

5. 小心抽去上清液。

6. 加入 12.5 毫升 清理液（Reagent A），混匀。

7. 放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 3000g

8. 小心抽去上清液。

9. 重复实验步骤 6 至 8 一次。

10. 加入 10 毫升 平衡液（Reagent B），混匀。

11. 放进 4℃台式离心机离心 10 分钟，速度为 3000g

12．小心抽去上清液。

13. 加入 500  微升 平衡液（Reagent B）

14. 加入 100 微升 酸珠液（Reagent C）

15. 在 4℃环境下，持续强力涡旋震荡 2 分钟，间歇 1 分钟。

16. 重复实验步骤 15 五次。

17. 放进 4℃台式离心机离心 5 分钟，速度为 300g

18. 小心移取上清液（500 微升）到新的 15 毫升锥形离心管（收集管）。

19. 加入 500 微升 平衡液（Reagent B）到上述含有 酸珠液（Reagent C）的锥形离心管。

20. 涡旋震荡 15 秒。

21. 放进 4℃台式离心机离心 5 分钟，速度为 300g

22. 小心移取上清液（500 微升）合并到上述收集管。

23. 重复实验步骤 19 至 22 二次。

24. 将收集管（总量为 2 毫升上清液）放进 4℃台式离心机离心 5 分钟，速度为 3800g

25. 小心抽掉上清液，保留沉淀颗粒――此为细胞壁成分。

26. 加入 500 微升 净化液（Reagent D），混匀。

27. 转移到 1.5 毫升离心管。

28. 放进 4℃微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 5000g

29．小心抽掉上清液。

30. 重复实验步骤 26 至 29 三次。

31. 加入 500 微升 清理液（Reagent A），混匀。

32. 放进 4℃微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 5000g

33．小心抽掉上清液。

34．加入 200 至 500 微升 保存液（Reagent E） 35．放进－70℃的冰箱里备用。

36．或放入冰槽里，继续各种后续操作。

注意事项

1. 本产品为 20 次操作。

2. 所有操作均须在 4℃状态下进行。

3. 细胞生长切莫过度，否则影响蛋白表达和细胞裂解。

4. 酸珠液（Reagent C）为固体状，移取方法为：使用 1 毫升枪头，将尖端部分剪去；或使用0.5 毫升 PCR 管的盖子内圈盛满；或秤重 0.1 克。

5. 50 毫升（0D600＝1）菌液湿重约 1 克。

6. 50 毫升（0D600＝1）菌液可获得约 250 毫克湿重的胞壁成分，其中 94％为多糖，5％为蛋白。

7. 制备产物如果放在－70℃冰箱里储存备用，避免反复冻融。

8. 本公司提供系列酵母细胞制备试剂产品。

质量标准

1. 本产品经鉴定性能稳定。

2. 本产品经鉴定无蛋白酶污染 。

使用承诺 

用户收到货后， 应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后 10 天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告） 与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。

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