细胞分化软骨细胞II型胶原蛋白免疫组化染色试剂盒说明书
发布时间：2023-11-01 15:59:16作者：羽哚生物来源：羽哚生物点击：404 次
主要用途
细胞分化软骨细胞 II 型胶原蛋白免疫组化染色试剂是一种旨在使用免疫抗体显色技术，即通过抗 II 型多克隆抗体以及辣根过氧化物酶缀合物二抗，使用染料二氨基联苯胺染色显示棕褐色，分析 II 型胶原蛋白表达和分布状况的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。主要适用于各种人体、大鼠、猿猴、猪、牛、小鼠、兔、狗、鸡、马等软骨细胞 II 型胶原蛋白分析。广泛用于软骨细胞识别、分化、异常病变的研究。产品严格无菌，即到即用，显色清晰，操作简捷，性能稳定。
技术背景
胶原蛋白（collagen）是最为丰富的蛋白质家族，构成结缔组织的主要元素，包括皮肤、骨组织、筋腱（tendon）、韧带（ligament）、心脏等，在炎症过程中发生重要作用。哺乳动物组织中有超过 26 个类型胶原蛋白，由 3个α链（甘氨酸-脯氨酸-羟脯氨酸）组成，构建稳定且牢固的三重螺旋结构（triple helical structure），抵抗各种压力，包括蛋白酶降解、热力、以及各种化学性和物理性影响。其中 I 型胶原蛋白为纤维状（fibrillar）胶原蛋白，由 2 个相同的α1 链和 1 个α2 链组成；而 II 型胶原蛋白限于无血管组织，例如软骨组织、眼睛的玻璃体组织、关节透明软骨（articular hyaline cartilage）等，会诱发关节炎、眼病和多软骨炎（polychondritis）等疾病。多聚 II 型胶原蛋白构建成人关节软骨组织的核心纤维网状结构，占三分之二干重和细胞外框架。通过抗 I 型胶原蛋白多克隆抗体以及辣根过氧化物酶缀合物二抗（Peroxidase conjugated antibody）反应，进而使用染料二氨基联苯胺染色显示 II 型胶原蛋白软骨细胞为棕褐色。
产品内容
清理液（Reagent A）
固着液（Reagent B）
封阻液（Reagent C）
一抗液（Reagent D）
二抗液（Reagent E）
显色液 A（Reagent F）
显色液 B（Reagent G）
产品说明书
保存方式
保存一抗液（Reagent D）、二抗液（Reagent E）和显色液 A（Reagent F）在－20℃冰箱里，严格避免反复冻融，其余的保存在 4℃冰箱里；二抗液（Reagent E）和显色液 A（Reagent F），避免光照；有效保证 3 月。
用户自备
盖玻片：用于抗体孵育操作。
光学显微镜：用于细胞染色后观察分析。
特别注意
1． 显色液 A（Reagent F）和显色液 B（Reagent G）必须在实验操作前即刻混匀；混匀后切忌久放不用或储存后备用；用完扔掉。
2． 显色液 A（Reagent F）如果出现沉淀，须过滤后再用。
实验步骤
一、样本固着处理
1． 小心加上 xx 微升清理液（Reagent A）在细胞载玻片上，铺满整个细胞载玻片样品表面。
2． 室温下孵育 1 分钟。
3． 小心移去细胞载玻片上的清理液（Reagent A）。
4． 小心加上 xx 微升固着液（Reagent B），铺满整个细胞载玻片样品表面。
5． 在 4℃冰箱里孵育 10 分钟。
6． 小心移去细胞载玻片上的固着液（Reagent B）。
7． 室温下，将细胞载玻片置入 xx 毫升清理液（Reagent A）中孵育 5 分钟。
8． 小心移去细胞载玻片上的清理液（Reagent A）。
9． 小心加上 xx 微升封阻液（Reagent C），铺满整个细胞载玻片样品表面。
10．室温下孵育 30 分钟。
11．小心移去细胞载玻片上的封阻液（Reagent C）。
12．室温下，将细胞载玻片置入 xx 毫升清理液（Reagent A）中孵育 5 分钟。
13．小心移去细胞载玻片上的清理液（Reagent A）。
二、 免疫标记处理
1． 小心加上 xx 微升含有一抗液（Reagent D），铺满整个细胞载玻片样品表面。
2． 室温下，孵育 1 小时，保持湿润，避免干燥（注意：可以使用盖玻片盖上孵育）。
3． 小心移去细胞载玻片上的一抗液（Reagent D）。
4． 室温下，小心将细胞载玻片置入 xx 毫升清理液（Reagent A）中孵育 2 分钟。
5． 小心移去细胞载玻片上的清理液（Reagent A）。
三、样本染色处理
在染色前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的显色液 A（Reagent F）置入冰槽里融化，然后移取 xx 微升显色液 A（Reagent F）和 xx 毫升显色液 B（Reagent G）到 2 毫升离心管，充分混匀，标记为显色工作液，置于暗室。然后进行下列操作：
1． 小心加上 xx 微升二抗液（Reagent E）在细胞载玻片上，铺满整个细胞载玻片样品表面（注意：可以使用盖玻片盖上孵育）。
2． 室温下孵育 30 分钟，避免光照。
3． 小心移去细胞载玻片上的二抗液（Reagent E）。
4． 室温下，小心将细胞载玻片置入 xx 毫升清理液（Reagent A）中孵育 2 分钟。
5． 小心移去细胞载玻片上的清理液（Reagent A）。
6． 小心加上 xx 微升含有显色液 A（Reagent F）和显色液 B（Reagent G）的显色工作液，铺满整个细胞载玻片样品表面。
7． 室温下孵育 5 至 30 分钟，或直至样本出现棕褐色。
8． 小心移去细胞载玻片上含有显色液 A（Reagent F）和显色液 B（Reagent G）的显色工作液。
9． 室温下，小心将细胞载玻片置入 xx 毫升清理液（Reagent A）中浸泡 5 秒。
10．小心移去细胞载玻片上的清理液（Reagent A）。
11．（选择步骤）进行甲基绿或苏木素复染（注意：建议使用甲基绿复染试剂盒）。
12．放上盖玻片或封片。
13．即刻在一般光学显微镜下观察：阳性细胞呈现棕褐色。
注意事项
1． 本产品为 10 次操作。
2． 操作时须戴手套，以防污染。
3． 清理液（Reagent A）50 毫升置于小型染色缸里，可重复使用。
4． 所有操作在室温下进行。
5． 每次更换试剂溶液时，保持细胞载玻片面基本晾干。空气中晾干状态为没有水滴，呈湿润状态，可见反光。
6． 试剂溶液在细胞载玻片表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满细胞载玻片表面。
7． 细胞显色，避免过度，密切目测观察，控制时间。
8． 细胞显色完成后，即刻进行光学显微镜观察。
9． 染色参考图像如下（联系客服索取）。
10．本公司提供系列软组织检测试剂产品。
相关产品：
相关阅读：
羽哚生物
欢迎咨询QQ：2579524436
联系电话：18317267598
扫描右侧二维码添加微信
我们将竭诚为您提供让您满意的服务！
