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ELISA检测样品的处理方法

发布时间:2021-01-08作者:yzysw来源:云之羽点击:

一、组织匀浆的制备

1、取组织块(0.1g~0.5g)最少可到5~10mg在冰冷的PBS中漂洗,滤纸拭干,准确称重,放入5ml的匀浆管中。
2、按重量(g):体积(ml)=1:9的比例加入9倍体积的匀浆介质于匀浆管中,冰水浴条件下,用眼科小剪尽快剪碎组织块。
3、匀浆的方式:手工匀浆,机器匀浆。
① 手工匀浆:左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手将捣杆垂直插入套管中,上下转动研磨数十次(6~8分钟),充分研碎,制成10%的匀浆液。
② 机器匀浆:用组织捣碎机10000~15000 转/分 上下研磨制成10%组织匀浆,也可用内切式组织匀浆机制备(匀浆时间10秒/次,间隙30秒,连续3~5次,在冰水中进行,可适当延长匀浆时间),镜检观察:
4、将制备好的10%匀浆液用普通离心机或低温低速离心机3000转/分左右,离心10~15分钟,取上清液进行测定.

二、匀浆介质

一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸盐缓冲液(PBS),客户可根据样本及测定指标的情况自行设定浓度,目的是保持样本的等渗环境。

三、样本保存:

组织样本暂时不测定,可立即低温冻存,温度越低越好,中间如不反复冻融,-20℃以下可保 存三个月,-70℃以下可保存六个月

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