细胞分化软骨细胞II型胶原蛋白免疫组化染色试剂盒说明书
发布时间：2023-11-01 15:59:16作者：云之羽来源：云之羽点击：132 次
主要用途
细胞分化软骨细胞 II 型胶原蛋白免疫组化染色试剂是一种旨在使用免疫抗体显色技术，即通过抗 II 型多克隆抗体以及辣根过氧化物酶缀合物二抗，使用染料二氨基联苯胺染色显示棕褐色，分析 II 型胶原蛋白表达和分布状况的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。主要适用于各种人体、大鼠、猿猴、猪、牛、小鼠、兔、狗、鸡、马等软骨细胞 II 型胶原蛋白分析。广泛用于软骨细胞识别、分化、异常病变的研究。产品严格无菌，即到即用，显色清晰，操作简捷，性能稳定。
技术背景
胶原蛋白（collagen）是最为丰富的蛋白质家族，构成结缔组织的主要元素，包括皮肤、骨组织、筋腱（tendon）、韧带（ligament）、心脏等，在炎症过程中发生重要作用。哺乳动物组织中有超过 26 个类型胶原蛋白，由 3个α链（甘氨酸-脯氨酸-羟脯氨酸）组成，构建稳定且牢固的三重螺旋结构（triple helical structure），抵抗各种压力，包括蛋白酶降解、热力、以及各种化学性和物理性影响。其中 I 型胶原蛋白为纤维状（fibrillar）胶原蛋白，由 2 个相同的α1 链和 1 个α2 链组成；而 II 型胶原蛋白限于无血管组织，例如软骨组织、眼睛的玻璃体组织、关节透明软骨（articular hyaline cartilage）等，会诱发关节炎、眼病和多软骨炎（polychondritis）等疾病。多聚 II 型胶原蛋白构建成人关节软骨组织的核心纤维网状结构，占三分之二干重和细胞外框架。通过抗 I 型胶原蛋白多克隆抗体以及辣根过氧化物酶缀合物二抗（Peroxidase conjugated antibody）反应，进而使用染料二氨基联苯胺染色显示 II 型胶原蛋白软骨细胞为棕褐色。
产品内容
清理液（Reagent A）
固着液（Reagent B）
封阻液（Reagent C）
一抗液（Reagent D）
二抗液（Reagent E）
显色液 A（Reagent F）
显色液 B（Reagent G）
产品说明书
保存方式
保存一抗液（Reagent D）、二抗液（Reagent E）和显色液 A（Reagent F）在－20℃冰箱里，严格避免反复冻融，其余的保存在 4℃冰箱里；二抗液（Reagent E）和显色液 A（Reagent F），避免光照；有效保证 3 月。
用户自备
盖玻片：用于抗体孵育操作。
光学显微镜：用于细胞染色后观察分析。
特别注意
1． 显色液 A（Reagent F）和显色液 B（Reagent G）必须在实验操作前即刻混匀；混匀后切忌久放不用或储存后备用；用完扔掉。
2． 显色液 A（Reagent F）如果出现沉淀，须过滤后再用。
实验步骤
一、样本固着处理
1． 小心加上 xx 微升清理液（Reagent A）在细胞载玻片上，铺满整个细胞载玻片样品表面。
2． 室温下孵育 1 分钟。
3． 小心移去细胞载玻片上的清理液（Reagent A）。
4． 小心加上 xx 微升固着液（Reagent B），铺满整个细胞载玻片样品表面。
5． 在 4℃冰箱里孵育 10 分钟。
6． 小心移去细胞载玻片上的固着液（Reagent B）。
7． 室温下，将细胞载玻片置入 xx 毫升清理液（Reagent A）中孵育 5 分钟。
8． 小心移去细胞载玻片上的清理液（Reagent A）。
9． 小心加上 xx 微升封阻液（Reagent C），铺满整个细胞载玻片样品表面。
10．室温下孵育 30 分钟。
11．小心移去细胞载玻片上的封阻液（Reagent C）。
12．室温下，将细胞载玻片置入 xx 毫升清理液（Reagent A）中孵育 5 分钟。
13．小心移去细胞载玻片上的清理液（Reagent A）。
二、 免疫标记处理
1． 小心加上 xx 微升含有一抗液（Reagent D），铺满整个细胞载玻片样品表面。
2． 室温下，孵育 1 小时，保持湿润，避免干燥（注意：可以使用盖玻片盖上孵育）。
3． 小心移去细胞载玻片上的一抗液（Reagent D）。
4． 室温下，小心将细胞载玻片置入 xx 毫升清理液（Reagent A）中孵育 2 分钟。
5． 小心移去细胞载玻片上的清理液（Reagent A）。
三、样本染色处理
在染色前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的显色液 A（Reagent F）置入冰槽里融化，然后移取 xx 微升显色液 A（Reagent F）和 xx 毫升显色液 B（Reagent G）到 2 毫升离心管，充分混匀，标记为显色工作液，置于暗室。然后进行下列操作：
1． 小心加上 xx 微升二抗液（Reagent E）在细胞载玻片上，铺满整个细胞载玻片样品表面（注意：可以使用盖玻片盖上孵育）。
2． 室温下孵育 30 分钟，避免光照。
3． 小心移去细胞载玻片上的二抗液（Reagent E）。
4． 室温下，小心将细胞载玻片置入 xx 毫升清理液（Reagent A）中孵育 2 分钟。
5． 小心移去细胞载玻片上的清理液（Reagent A）。
6． 小心加上 xx 微升含有显色液 A（Reagent F）和显色液 B（Reagent G）的显色工作液，铺满整个细胞载玻片样品表面。
7． 室温下孵育 5 至 30 分钟，或直至样本出现棕褐色。
8． 小心移去细胞载玻片上含有显色液 A（Reagent F）和显色液 B（Reagent G）的显色工作液。
9． 室温下，小心将细胞载玻片置入 xx 毫升清理液（Reagent A）中浸泡 5 秒。
10．小心移去细胞载玻片上的清理液（Reagent A）。
11．（选择步骤）进行甲基绿或苏木素复染（注意：建议使用甲基绿复染试剂盒）。
12．放上盖玻片或封片。
13．即刻在一般光学显微镜下观察：阳性细胞呈现棕褐色。
注意事项
1． 本产品为 10 次操作。
2． 操作时须戴手套，以防污染。
3． 清理液（Reagent A）50 毫升置于小型染色缸里，可重复使用。
4． 所有操作在室温下进行。
5． 每次更换试剂溶液时，保持细胞载玻片面基本晾干。空气中晾干状态为没有水滴，呈湿润状态，可见反光。
6． 试剂溶液在细胞载玻片表面时，避免有气泡存在，同时确保铺满细胞载玻片表面。
7． 细胞显色，避免过度，密切目测观察，控制时间。
8． 细胞显色完成后，即刻进行光学显微镜观察。
9． 染色参考图像如下（联系客服索取）。
10．本公司提供系列软组织检测试剂产品。
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